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药品无菌检查方法验证试验记录 共 页 第 页 检品名称 褥疮膏 规格 8g/瓶 批 收检日期 2013年5月12日 检品数量 50瓶 包装 塑料瓶 生产单位 供样单位 检验依据 中国药典2010年版一部 报告日期 年 月 日 实验仪器： 仪器 编号 仪器 编号 高压蒸汽灭菌器YXQ-LS-50SII S14 LAH-250A型生化培养箱 S24 HZY-III型智能集菌仪 S20 HH-B11-600电热恒温培养箱 S23 全封闭集菌培养器（杭州高得医疗器械有限公司，批号 菌液制备：10倍稀释法 菌种 代数 接种至 菌悬液制备 大肠埃希菌[CMCC(B)44102] 3 营养肉汤培养基 用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌小于100cfu(菌落形成单位)的菌悬液 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003] 3 营养肉汤培养基 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)65301] 3 营养肉汤培养基 铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104] 3 营养肉汤培养基 生孢梭菌[CMCC(B)64941] 3 硫乙醇酸盐培养基 白色念珠菌[CMCC(F)98001] 3 改良马丁液体培养基 黑曲霉菌[CMCC(F)98003] 3 改良马丁琼脂斜面培养基 加入0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，再同上制成每1ml含菌小于100cfu的菌悬液 活菌预实验---活菌计数 菌 名 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 代 数 第三代 第三代 第三代 第三代 第三代 第三代 第三代 稀释级 1 2 平均值 4培养基灵敏度检查 取每管装量为12ml 的硫乙醇酸盐流体培养基9 支，分别接种小于100 cfu 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2 支，另1支不接种作为空白对照，培养3 天； 取每管装量为9ml 的改良马丁培养基5 支,分别接种小于100 cfu 的白色念珠菌、黑曲霉各2 支，另1 支不接种作为空白对照，培养5 天。逐日观察结果。结果见表 表：培养基灵敏度检查结果 培养基 菌种 管数 观察结果 1d 2d 3d 4d 5d 硫乙醇酸盐流体培养基 金黄色葡萄球菌 1 2 铜绿假单胞菌 1 2 枯草芽孢杆菌 1 2 生孢梭菌 1 2 空白组 改良马丁培养基 白色念珠菌 1 2 黑曲霉 1 2 空白组 “—”表示无菌生长。“+”表示生长良好 结果判定： 检验方法验证 薄膜过滤法： 取供试品0.5g，加0.9%无菌氯化钠溶液稀释至20ml，无菌滤纸滤过，然后再用0.9%无菌氯化钠溶液20ml，冲洗残渣，合并滤液，按照薄膜过滤法过滤， 0.9%无菌氯化钠溶液冲洗3次，每次100ml，最后一次冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，分别加入相应硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基100ml，作为样品验证管。另取样品验证管用试验菌加入至40ml0.9%无菌氯化钠溶液中，无菌滤纸滤过，滤液按照薄膜过滤法过滤， 0.9%无菌氯化钠溶液冲洗3次，每次100ml，最后加入同体积培养基，作为阳性对照管。 空白组：取供试品按照样品验证管制备方法，不加试验菌，分别加入相应硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基100ml，作为样品管，同时以同体积的培养基的培养器作为空白对照组。 按规定温度培养3～5天。各试验菌同法操作。结果见表 无菌检查法验证（薄膜过滤法） 培养基名称 菌种 样品验证管 阳性对照管 1d 2d 3d 4d 5d 1d 2d 3d 4d 5d 硫乙醇酸盐流体培养基 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 空白组 改良马丁培养基 白色念珠菌 黑曲霉 空白组 “+”表示有菌生长；“++”表示生长良好，“—”表示无菌生长 无菌检查验证结论：根据以上检验结果，经方法学验证试验： 验证结论 按照《中国药典》（2005年版）无菌检查法的方法验证，供试品褥疮康的无菌检查法为：取本品规定量，每瓶取0