硅胶柱层析剖析.pptVIP

硅胶柱层析技术 常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。 其实硅胶柱层析技术也可以称作硅胶吸附柱色谱技术 色谱法，又称层析法。是一种以分配平衡为机理的分配方法。色谱体系包含两个相，一个是固定相，一个是流动相。当两相相对运动时，反复多次的利用混合物中所含各组分分配平衡性质的差异，最后达到彼此分离的目的。 色谱法按固定相的状态可分为柱色谱、平板色谱和棒色谱三种，而实验室中最常用的是柱层析和薄层层析，以及它们之间的配合应用。 柱层析 1、吸附色谱的原理 在一定条件下，硅胶与被分离物质之间产生作用，这种作用主要是物理和化学作用两种。物理作用来自于硅胶表表面与溶质分子之间的范德华力；化学作用主要是硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键作用。 2、操作步骤 2.1 硅胶准备 硅胶一般选用250-400目(即40-63μm直径的硅胶颗粒)，根据ΔRf选用硅胶的用量。 2.2 实验仪器准备 一支玻璃色谱柱,一个铁架台,烧杯,锥形瓶,径口直径较大的玻璃漏斗,一支玻璃棒, 等。 2.3 装柱 2.3.1 吸附剂的加入 ①干法：将吸附剂一次加入色谱管，振动管壁使其均匀下沉，然后沿管壁缓缓加入开始层析时使用的流动相，或将色谱管下端出口加活塞，加入适量的流动相，旋开活塞使流动相缓缓滴出，然后自管顶缓