2012年高考生物一轮复习DNA和蛋白质技术课件_新人教版选修1.pptVIP

“备”则“倍” 有准备、有规划的人生更精彩！ * 专题5　DNA和蛋白质技术 重难点聚焦 考点1　DNA的粗提取与鉴定 　　1.基本原理 　　①DNA在NaCl溶液中的溶解度随氯化钠溶液浓度的变化而改变，DNA在0.14mol／L的NaCl溶液中溶解度最低。 　　②DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。 　　2.方法目的 鉴定DNA 加入二苯胺，并沸水浴 DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质 加入冷却酒精（95%） 嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质 加入嫩肉粉 ①NaCl溶液物质的量浓度为2mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质； ②当NaCl溶液稀释至0.14mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl溶液的部分蛋白质和其他杂质 溶于NaCl溶液中并稀释 目的 方法 　　3.两次加入蒸馏水的目的 　　第一次目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA；第二次目的是稀释NaCl溶液，使DNA从溶液中析出。 　　哺乳动物成熟的红细胞不含细胞核，也没有DNA，不适合做DNA提取的材料，但是提取血红蛋白的理想材料。 考点2　PCR技术 　　1.PCR原理：利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解旋与结合。 　　2.DNA的合成方向 　　DNA的两条链是反向平行的，通常将DNA的羟基末端称为3′端，而磷酸基团的末端称为5′端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。 　　3.PCR的反应过程 　　PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。 　　从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。 　　4.细胞内DNA复制和PCR比较 ①需提供DNA复制的模板 ②四种脱氧核苷酸作原料 ③子链延伸的方向都是从5′端向3′端 相同点 高温 体内温和条件 温度 DNA或RNA RNA 引物 TaqDNA聚合酶 DNA解旋酶、DNA聚合酶 酶 80~100℃高温解旋，双链完全分开 在解旋酶作用下边解旋边复制 解旋 不同点 PCR 细胞内DNA复制 　　5.PCR技术优点及应用 　　PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。这项技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题，被广泛地应用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和DNA序列测定等各方面。 　　6.DNA含量的测定方法 　　（1）稀释：2μLPCR反应液加入98μL蒸馏水，将样品进行50倍稀释。 　　（2）对照调零：以蒸馏水作对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的读数调节至零。 　　（3）测定：取DNA稀释液100μL至比色杯中，测定260nm处的光吸收值。 　　（4）计算：DNA含量（μg/mL）=50×（260nm的读数）×稀释倍数 　　①理论上DNA扩增呈指数增长，即一条DNA片段循环n次后数目为2n。 　　②PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在－20℃储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。 　　③通过控制温度来控制双链的解聚和结合，现在的PCR仪实质上也是一台能够自动控制温度的仪器。 考点3　血红蛋白的提取和分离 　　1.凝胶色谱法 　　凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法之一。所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，这些小球体大多数是由多糖类化合物构成的，小球体内部有许多贯穿的通道，当一个含有各种分子的样品溶液缓慢流经时，相对分子质量较大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路程较短，移动速度较快；相对分子质量较小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道，通过的路程较长，移动速度较慢。因此，样品中相对分子质量较大的蛋白质先流出，相对分子质量较小的分子后流出。 　　2.电泳 　　电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物大分子，如多肽、蛋白质、核酸等都具有可解离基团，它们在某个特定的pH下会带上正电或负电；在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极方向移动。 电泳技术就是在电场的作用下，利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。