高木化半纤维素剖析.ppt

色谱柱分离法1 色谱柱分离法是基于混合物中各组分与色谱柱的填料间结合力强弱的差异分离的技术 适用于分离糖类的色谱柱填料有铝矾土、碱式铝矾土、硅胶、石英砂、海砂、沸石、活性炭、离子交换树脂等 色谱柱分离法-离子交换树脂法 利用离子交换树脂经改性或改良后其功能基团与糖类形成的络合物或衍生物的强度不同 硫酸盐、亚硫酸盐、酸式亚硫酸盐、碳酸盐等结构的阴离子交换树脂和钙、锶、银、联铵盐等结构的阳离子交换树脂 (磺酸盐型 )可用于分离糖类混合物 .其中钙型磺酸树脂已成功用于工业化分离果糖和葡萄糖、木糖醇和山梨糖醇等. 离子交换树脂法--影响因素 树脂特性 色谱柱的高径比及总长度 分离糖类混合物的组成 给料浓度、流量 分离温度 溶剂种类 连续操作或分批操作 膜分离法 1 膜分离过程的实质是物质透过或被截留于膜的过程 ,近似于筛分过程 ,依据滤膜孔径的大小而达到物质分离的目的 按分离粒子或分子大小可将膜分离法分为 :反渗透、透析、电渗析、纳膜过滤、超滤、微滤等 6种 膜分离法 2 反渗透又称逆渗透 ,是一种以压力差为推动力 ,从溶液中分离出溶剂和小分子物质的膜分离操作 . 由于一般被分离糖液的浓度较高 ,要求连续柱膜的长度而使分离过程变得不经济 膜分离法3 在果糖和葡萄糖的分离中 ,可通过向料液中加入NaCl、NaCO3或NaHSO3加以改善 . 这些盐类只能和葡萄糖形成络合物而不能和果糖形成络合物 , 易分离. 由于反渗透在分离过程完成的同时 ,也将料液进行了浓缩 ,节约了后续浓缩工艺的费用 纳膜分离法 4 纳膜过滤也是一种以压力差为推动力, 介于超滤和反渗透之间 ,从溶液中分离出 30 0～ 1 0 0 0小相对分子质量物质的膜分离过程 . 从纳膜过滤分离物质的分子量范围来看 ,选择不同孔径的纳滤膜,可将单糖、二糖、三糖以至五糖以上组分依次分开 纳膜分离法5 和反渗透一样，纳膜过滤也有分离、浓缩一步完成的优点 由于制膜技术的限制, 纳滤膜的截留孔径不是绝对的, 而是一个范围的平均值, 因此要达到较高的分离度往往需要较长的柱膜长度 除相对分子质量大小差异外, 若能增加截留组分和透过组分对膜渗透率的差异, 纳膜过滤用于分离功能低聚糖将是可行的. 酶法 该法的原理是利用酶制剂将低聚糖混合物中的某一或某些组分专一性地除去. 可以用葡萄糖氧化酶或葡萄糖氧化酶和过氧化物酶将低聚糖混合物中的葡萄糖氧化为葡萄糖酸, 然后以葡萄糖酸钙沉淀法或离子交换树脂法都可很容易地将葡萄糖酸除去 . 微生物发酵法 利用多数功能性低聚糖的难发酵性 ,选择适当的微生物将非功能性低聚糖成分发酵除去 酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)可以将功能性低聚糖混合物中的葡萄糖选择性地发酵为酒精而除去 . 微生物发酵法 国外在这一方面已取得突破性进展 国外学者曾利用该法将果糖提纯到 1 0 0 %,异麦芽糖提纯到96. 5%. 投资小、成本相对低廉 开发功能性低聚糖的生物分离方法大有前途 木低聚糖的分离提纯 1 采用聚丙烯酰胺凝胶柱分离木低聚糖时, 柱的长短应由分离效果来决定。柱越长,分辨力越高, 但又要保证流动相有一合适的流速。 木低聚糖的分离提纯 2 利用聚丙烯酰胺凝胶柱 (Bio- Gel P-4)能将木低聚糖混合样品较好地分离开来 当采用以下分离条件时可以得到木二糖至木四糖的单一组分。 分离条件为:柱长 Φ3.0×120cm，去离子水为流动相，流速 25ml/ h，柱温 50℃。 木低聚糖的分离提纯3 实验证明，通过还原糖浓度的测定可以初步判断低聚糖的分离效果 在无高效液相设备的条件下不失为一种简单、快速和经济的分析方法 采用蒸汽爆破技术制备木低聚糖 利用蒸汽爆破技术制备木低聚糖, 优点是成本低、简便、易操作, 缺点是汽爆液的成分十分复杂 加水可能有利于戊聚糖的溶出 ,缓解其降解。 斑点捕集洗脱示意图 * (3) 气相色谱法 流动相为气体，一般将单糖制成挥发性衍生物，如糖三甲基硅醚、糖醇(腈)醋酸酯等。 醛糖三甲基硅醚化反应 醛糖还原为糖醇再硅醚化 糖肟硅醚化 醛糖制成糖醇醋酸酯 六种单糖的气相色谱图 (4) 液相色谱法 液体做流动相，被分离组分不必有挥发性 根据固定相不同又分为离子交换色谱(具有带电荷的官能团交换剂为固定相，如对酸性糖用醋酸盐型，它属于阴离子型，而流动相为醋酸或其溶液) 液-液色谱(也叫分配色谱，用全多孔型硅胶硅烷化键合固定相，而流动相为乙腈-水或乙腈-醋酸钠，此法用的较多) 液相色谱法 液-固色谱(也叫吸附色谱，用高比表面积的微粒，如全多孔型硅胶锂固定相，糖转变为衍生物，流动相用丙酮-己烷或乙醚-戊烷) 凝胶色谱(也叫排阻色谱，固定相为具有不同孔径的多孔性硅胶或惰性的交联聚合物凝胶，分离的