疾病产生的分子基础教材.ppt

② 利用随机插入突变进行基因敲除——基因捕获法 利用某些能随机插入基因序列的病毒，细菌或其他基因载体，在目标细胞基因组中进行随机插入突变，建立一个携带随机插入突变的细胞库，然后通过相应的标记进行筛选获得相应的基因敲除细胞。 ③ What is RNAi ? RNA干扰（RNA interference，RNAi） 内源性或外源性双链RNA介导的细胞内mRNA发生特异性降解，导致靶基因的表达沉默，产生相应的功能表型的缺失现象。 转录后基因表达抑制现象的发现 ＋ CHS Gene 矮牵牛花 (Jorgensen, R, 1990) RNA干扰(RNA interference, RNAi) RNAi 是将一段双链的RNA 序列导入机体或细胞中, 机体或细胞中与之有同源序列的基因表达将会受到抑制, 甚至表达受到完全抑制 基因敲除技术与诺贝尔奖 三位在基因敲除技术方面进行了卓越、开拓性工作并取得了显著成就的科学家分享了诺贝尔生理或医学奖，他们是美国盐湖城犹他州大学的Marie Capecchi教授、美国北卡罗来纳州大学的Oliver smithies教授以及英国加蒂夫大学的Martin Evans教授 （5）基因诱导超表达技术 将目的基因全长序列与高活性启动子或组织特异性启动子融合，经过转化后，在诱导剂的作用下或在特定的组织细胞中，目的基因超表达，相应的基因表达产物大量积累。比较加入诱导剂前后的表型变化，从而确定目的基因在疾病发生中的作用。 三、HGP与疾病相关基因的研究 随着人类基因组草图测定的完成，宣告了“ 后基因组时代 ”的到来。功能基因组学成为研究的重心，蛋白质组学的研究受到了空前的关注，也为疾病相关基因的克隆创造了条件。 同一种细胞或组织，处于不同的状态（生理与病理等），发育的不同阶段，受到外界的不同影响时，都可能使细胞中蛋白质的情况产生相应的变化，从而产生不同的蛋白质组。蛋白质组学关注和研究的就是这些变化。 研究蛋白质与疾病相互关系的方法 ELISA 免疫印迹 免疫沉淀 蛋白质亲和层析 毛细管电泳 四、生物信息学主要研究领域 ⑴ 建立和管理各种生物信息数据库 ①核酸序列数据库 ②三维结构数据库 ⑵ 基因组序列信息的提取和分析 ①序列比对（Alignment）和结构比对 ②蛋白质结构预测 ③蛋白质编码基因的计算机辅助识别 ④非编码区分析和DNA语言研究 ⑤ 分子进化和比较基因组学 、遗传密码的起源 ⑥ 序列重叠群（Contigs）的装配 ⑶ 生物大分子结构模拟及其与疾病、药物设计 ⑷ DNA芯片和微阵列的发展 建立和管理各种生物信息数据库 各种生物数据库的建立是一切生物信息学工作的基础。 数据库是生物信息学的主要内容，各种数据库几乎覆盖了生命科学的各个领域。如 EBI 的 SRS(Sequence Retrieval System) 包含了核酸序列库、蛋白质序列库，三维结构库等 30 多个数据库及CLUSTALW、PROSITESEARCH 等强有力的搜索工具，用户可以进行多个数据库的多种查询。 生物信息数据库 核酸序列数据库 Genbank，美国国家生物技术信息中心的数据库（/）。 ?UCSC，分子生物实验室的数据库 （/）。 与基因组有关的数据库还有 ESTdb, GDB, GSDB OMIM ，EBI的SRS（sequence retrieval system）使用户可以进行多个数据库的多种查询。 蛋白质序列数据库有 SWISS-PROT（http://www.ebi.ac.uk/uniprot）, PIR （/）, OWL, NRL3D, TrEMBL等 蛋白质片段数据库有PROSITE（/）, BLOCKS, PRINTS等 SCOP（/scop/）, CATH, FSSP, 3D-ALI, DSSP等 * 5. 常见单基因病： 疾病名称 发病频率( ‰) 遗传方式 致病基因 典型症状 血友病A 0.1 X连锁 凝血因子Ⅷ 不规则出血 血友病B 0.03 X连锁