基因药物治疗解说.ppt

第七章 基因药物治疗的现状及对策 罗建新 提纲 概述 基因药物作用对象 理想的基因药物靶标 研发基因药物的关键 mRNA结构靶点研究新技术 mRNA靶点的确认 概述 生物技术药物以人类体细胞的基因组、转录本组和蛋白质组三个层次生物大分子为目标，基因药物的研究主要针对致病基因的DNA和基因转录本mRNA两类生物大分子 1977年Paterson等首先在无细胞体系中用单链DNA与基因RNA互补结合抑制基因转录．随后Stephenson使用13个核苷酸的单链DNA反义抑制肉瘤病毒Rous sarcoma virus的复制，开创了抑制基因表达的基因药物研究方向． 基因为靶的药物研发的3种手段 同源重组基因剔除(knock-out) 与DNA或RNA作用的合成寡核苷酸 和DNA或RNA结合的其它分子 基因药物作用对象 致病基因 外源致病微生物基因 基因的核酸药物制剂研究开始于70年代中期，第一个反义核酸药 Vitravene于1998年和1999相继在美国和欧洲上市. 目前全球已有近30个药物和治疗方案进入临床试验，治疗病人总数已接近1000人，其中以癌症为首位，涉及炎症、糖尿病，心血管疾病和AIDS等病毒感染疾病． 核酸药物治疗靶基因 致病靶基因 癌基因、抑癌基因、生长因子及其受体、细胞信号转导系统功能分子、细胞周期调控物质、酶类等基因 外源致病微生物 如HIV，SARS的结构基因 人体细胞中大多因为致病基因过表达或者异常表达(不适当的时间或地点表达)而导致了人类疾病发生．许多癌基因的高表达，原癌基因及肿瘤相关基因的激活都与肿瘤细胞发生密切相关．抑制此类基因的表达，封闭肿瘤药物抗性基因表达均可达到抑制肿瘤相关性状和肿瘤发生的目的． 就反义核酸基因治疗来说，目前有20多个针对卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、实体瘤等肿瘤发生相关基因的反义核酸药物进人工I～Ⅲ期临床研究 临床I期 ； H-ras基因反义核酸治疗实体瘤 临床Ⅱ期； c-myc基因反义核酸治疗心血管疾病(AVI Biopharma公司)． 临床3期； 细胞程序性死亡抑制基因bcl-2反义核酸治疗实体肿瘤、非何杰森病 理想的基因药物靶标 蛋白质药物研发的困难 体现细胞功能的蛋白质是传统药物作用的靶标，如今仍然是蛋白质组计划寻求的药物靶．然而，人体细胞约有3~4万种基因，能产生约50~100万种蛋白质，阐明如此浩大数量的蛋白质，和动态变化的蛋白质组以及网络式关联的蛋白质间相互作用非常困难，以蛋白质为药物靶标、从蛋白质的相互作用中遴选出功能蛋白作用靶，研发生物药物面临着巨大挑战． 基因药物优势 基因药物则主要针对功能基因组、和基因转录本mRNA等两类生物大分子 反基因组DNA为药物靶标的不足 基因DNA和组蛋白等因为形成复杂结构，使得小分子药物可及性差 基因剔除方法目前还仅仅处在实验室的细胞株以及动物模型实验阶段，尚不能预见未来是否能应用于疾病治疗 TFO和针对启动子区序列的decoy序列寡核苷酸虽然可以阻止转录因子同基因启动子结合，从而阻止基因转录表达，但因为启动子序列一般为细胞功能基因所共有，所以他们不能特异消除某种基因表达 因此，以反基因组DNA为药物靶标的反基因药物离应用用尚有较大差距． 反mRNA药物 前景光明 基因转录本mRNA的结构最为简单，同时在数量上又远远少于蛋白质，目前所见的基因 药物大多数为反mRNA药物．在此领域的研究日新月异，新思路、新技术方法不断涌现 研究功能基因mRNA的结构，发展针对mRNA的各种核酸药物：即反义寡核苷酸、特异水解基因mRNA的核酸酶(ribozyme和DNAzyme)以及具有干扰作用的双链RNA(siRNA)是目前研究基因药物的最佳策略 研发基因药物的关键 设计反mRNA基因药物(反义核酸、核酶、siRNA)时，首先要找准作用于RNA分子的部位(靶点) mRNA分子有一级结构，而且有高度折叠的二级及三级结构，除了应考虑他们与靶RNA分子的序列匹配性，即两种分子在一级结构(序列)上应互补，还应该考虑RNA分子高级结构的可及性(accessibility，或可接近性)。一般认为靶点主要处于可及位点(accessible site，或称可接近位点)，而可及位点即指mRNA高级结构上能识别并结合的位点．找到RNA可接近位点是成功设计特异结合而能发挥最高效果的关键． 反义核酸的设计 很久以来，反义核酸的设计仅仅考虑RNA的一级结构，例如选取基因的起始密码子、启动子、翻译起始因子结合位置、5′帽端序列、rRNA核糖体结合位点等，这样的反义核酸虽然在理论上与靶mRNA序列互补，但是由于靶点可能位于mRNA分子折叠结构的内部或刚性部位而寡核苷酸无法接近并结