T淋巴细胞转化实验解说.ppt

实验八 T淋巴细胞转化试验 检测方法： 形态学计数法 MTT法 同位素法 实验目的 实验原理 试剂与器材 操作步骤 结果判断 注意事项 实验讨论 一、形态学计数法 实验目的 1.掌握T淋巴细胞转化试验的原理。 2.熟悉淋巴母细胞的形态特征及判定方法。 T淋巴细胞在有丝分裂原PHA等刺激后，细胞的形态和代谢发生变化，发生一系列增殖反应，如出现细胞体积增大、核染色质疏松、蛋白质和核酸合成增加，并转化为淋巴母细胞。 试剂与器材 1. RPMIl640 培养液 。包含： 小牛血清10%、青霉素 100u/m1 、链霉素 100ug/m1，用无菌的3% NaHCO3 调 pH 至 7.2～7.4。 2. 植物血凝素（PHA）。用含10%小牛血清的RPMI 培养液稀释至500～1000?g/ml。 试剂与器材 3. 姬姆萨染液。 4. 标本 肝素抗凝人外周静脉血。 5．器材 细胞培养瓶、CO2培养箱、超净台、高压灭菌器、无菌过滤装置、离心机、显微镜等。 1．取肝素抗凝血0.2ml，注入预先加有1.8 ml RPMI 1640培养液的培养瓶内，同时加入PHA(500?g/ml )0.1 ml，对照瓶内不加PHA。混匀后置37?C、5%CO2培养箱内孵育72h，期间每天旋转摇匀一次。 2．培养