微生物实验 2.ppt

实验室规则 带证件，物品在抽屉，实验室穿工作服 实验室内不准饮食、吸烟 离实验室前应将双手刷洗干净 值日生应使实验室恢复原貌 将观察后的培养物送消毒室处理 实验评分标准及实验报告 实验20%：平时及实验报告10、技能考试10 实验报告：目的、原理、步骤、注意事项、结果及分析、思考题 实验报告：一般7.5-9.5，迟交7，订两本 实验报告应翔实、认真 实验技能考试：四区划线、革兰染色、油镜 实验一 无菌操作、细菌接种（斜面、液体、半固体和平板） 一、实验目的 1、混杂微生物分离纯化。 2、各种培养基上接种、移植和培养 3、无菌操作技术。 4、细菌在培养基上生长现象及菌落形态描述 5、细菌人工培养条件和培养方法 二、实验原理 1、无菌技术---在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其它微生物污染，同时也防止其污染环境的操作技术称为无菌技术。 2、微生物需要一定的条件下生长（培养基、培养温度和时间等） 三、实验内容 接种工具准备 无菌操作技术 斜面接种、液体接种、半固体穿刺接种和平板分区划线接种 三、实验材料和用具 菌种 大肠埃希菌（Escherichia coli）18-24h斜面培养物 1支 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）18-24h斜面培养物 1支 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌18-24h肉汤培养物混合菌液 1支 培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂平板培养基 2个/人 牛肉膏蛋白胨液体培养基（肉膏汤） 2支/人 牛肉膏蛋白胨固体斜面培养基 2支/人 半固体牛肉膏蛋白胨高层培养基 2支/人 无菌技术 无菌室：紫外灯30～60min ， 空气消毒 接种、倒平板：无菌室、超净工作台或酒精灯火焰 接种环针：用前后均需采用火焰灭菌 打开或关闭无菌试管和烧瓶：管口通过火焰2～3 次，开启后尽量靠近火焰。不可使含菌材料污染台面和其它物体 物品：应严格消毒, 使用中不得与未经灭菌的物品接触。 工作完毕：无菌室内用紫外灯照射3Omin，人员消毒洗手。 因不慎造成污染时 , 应及时用消毒液处理 四、实验方法 接种环的制作 接种环系采用一段长约4-5cm硬度适中的镍合金丝。环要求闭合以蘸取液体满环为准 标记：姓名（学号）、菌种 平板分区划线：肉汤混合菌种 斜面接种法：针 、环各一支 肉汤管接种法 ：液、固各一支 半固体穿刺接种法 ：斜面、平板各一支 接种工具及灭菌 琼脂平板四区划线法 示教 培养 接种后，37℃培养16-18h, 观察并记录 实验结束，各组菌种上交 实验结果 平板分区划线：注意3～4区是否有两种单个菌落，观察并描述分离的单个菌落的特征 斜面：生长旺盛的程度及表面有无菌苔生长 肉汤：表面-菌膜，液体中-混浊及色素，底部-沉淀 半固体：有动力的穿刺线模糊或整个半固体混浊。 细菌的培养特征 色 素 斜面培养基生长 液 体 培 养 基 生 长 半 固 体 生 长 动力观察 实验报告 用实验报告纸书写实验报告 （实验内容题目） 1、实验目的： 2、实验原理 3、实验方法与步骤 4、实验结果分析 5、注意事项 6、思考题：将实验指导书 实验二 细菌的简单染色、显微镜使用 一、实验目的 普通光学显微镜油镜的使用和保养方法 微生物的涂片、简单染色的操作 细菌菌落的形态观察 二、实验原理 菌落形态特征表述：大小、形态、颜色、质地、表面、透明度、隆起、边缘、气味。 细菌菌体染色：菌体细胞小、无色半透明，在显微镜下菌体与背景反差小，不易观察，通过染色，色素的沉着，反衬出菌体的形态。 光学显微镜的放大原理：物象的清晰度取决与放大倍数和显微镜的分辨率。分辨率是指显微镜能辨别物体最小间隔的能力。 分辨率（R）=0.61λ/N?A; N?A(数值口径)=n?sin?/2; ?为镜口角，最大值为180°，n为物镜与 标本之间介质的折射率。香柏油n=1.51，载玻片的n=1.52，几乎不发生折射。 三、实验内容 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌涂片 石炭酸复红染液、吕氏美蓝染液对涂片单染 无菌操作技术、接种环使用 油镜观察 四、实验材料 1、涂片染色用菌种 金葡（Staphylococcus aureus ）斜面2支/组 大肠（Escherichia coli ） 斜面2支/组 液1支/组 枯草（Bacillus subtilis） 斜面2支/组 2、染色液 石炭酸复红染液、吕氏美蓝染液 五、实验方法 涂片：载玻片--标记--一小环生理盐水（液体不加，菌液一环），--接种环取菌落少许--