细胞自噬与神经疾退行性疾病.ppt

检 测 Western Blot 标记自噬溶酶体结构是以往应用较为广泛的活体检测技术。 MDC 和AO 是常用的嗜酸性染料，用于标记酸性细胞器。当溶酶体内容物为酸性时，可获得阳性染色信号。 检 测 染色技术 检 测 MDC染色 自噬标志物的检测在自噬研究中发挥了巨大的作用，使得人们可以简便、动态、实时并定量地检测细胞内自噬水平。然而单独检测每一种自噬标志物都有一定的局限性和影响因素，在研究自噬时必须慎重考虑研究条件，适当设置阴性与阳性对照，使用多种自噬抑制剂或者基因沉默等技术，多方面、多层次进行实验以确认细胞的自噬水平。 检 测 在该疾病的早期阶段自噬起保护性作用，激活自噬可加速变性蛋白的清除来阻止疾病的进一步发展。然而，随着疾病的进展，蛋白质聚积物越来越多，对溶酶体蛋白酶降解的敏感性下降，自噬的持续性激活最终引发自噬性细胞死亡，这样自噬又促进了神经元的死亡。 阿尔茨海默氏病（Alzheimer’s）、亨廷顿氏病（Huntington’s）和帕金森氏病（Parkinson’s）等神经变性性疾病两个最主要的特征是：胞浆中蛋白聚集物的存在和大的蛋白裂解体系活性的改变。 神经退行性疾病 细胞自噬 自噬的基本概念 自噬的发生过程 自噬的调控 自噬的特点 自噬的检测 自噬与神经退行性疾病 AD PD HD 自噬与AD 细胞自噬 自噬的基本概念 自噬的发生过程 自噬的调控 自噬的特点 自噬的检测 自噬与神经退行性疾病 AD PD HD 自噬与PD 细胞自噬 自噬的基本概念 自噬的发生过程 自噬的调控 自噬的特点 自噬的检测 自噬与神经退行性疾病 AD PD HD 自噬与HD 谢谢!!! 发现：比利时科学家Christian de Duve在上世纪50年代通过电镜观察到自噬体（autophagosome)结构，并且在1963年溶酶体国际会议上首先提出了“自噬”这种说法。因此， Christian de Duve被公认为自噬研究的鼻祖。 Christian de Duve也因发现溶酶体，于1974年获得诺贝尔奖。 * * 在 1992 年，报道了酵母中自噬的形态和哺乳动物是相似的，然后他们进行了影响自噬囊泡的突变株的筛选，导致了第一个自噬相关基因（Autophagy-related, Atg） ATG-1 在 1997 年被发现。 * ①微自噬：通过溶酶体膜内陷直接包裹细胞内物质而进入溶酶体内发生降解，主要负责无用细胞器的降解。由于缺乏调控这一类型自噬的有效方法，从而阻碍了对微自噬与特定人类疾病之间联系的认识。 ②巨自噬：指底物蛋白或细胞器被一种双层膜的结构（粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜）包裹后形成直径约400～900纳米大小的自噬体（autophagosome)，接着自噬体的外膜与溶酶体膜融合，释放包裹底物蛋白的泡状结构到溶酶体中，并最终在一系列水解酶的作用下将其降解，我们将这种进入溶酶体腔中的泡状结构称为自噬小体。巨自噬即我们通常所说的自噬，主要介导胞质长寿命蛋白或细胞器的批量降解，其过程具有明显的阶段性。 ③分子伴侣介导的自噬：指含特定KFERQ五肽模序的蛋白质首先选择性地被以热休克蛋白70（Hsp70）为主的分子伴侣复合物识别。分子伴侣一底物复合物再进一步与溶酶体膜上受体溶酶体相关膜蛋白2A（lysosome-associated membrane protein 2A, LAMP2A）结合，帮助未折叠蛋白转位入溶酶体。其典型特点是具有选择性。 * * 巨自噬包括连续的几个阶段：双层膜的延伸、双层膜的闭合、与溶酶体的融合、包裹底物（自噬小体的）降解等。 步骤1：细胞接受自噬诱导信号后，在胞浆的某处形成一个小的类似“脂质体”样的膜结构，然后不断扩张，但它并不呈球形，而是扁平的，就像一个由2层脂双层组成的碗，可在电镜下观察到，被称为Phagophore，是自噬发生的铁证之一。步骤2：Phagophore不断延伸，将胞浆中的任何成分，包括细胞器，全部揽入“碗”中，然后“收口”，成为密闭的球状的autophagosome，我把它翻译为“自噬体”。电镜下观察到自噬体是自噬发生的铁证之二。有2个特征：一是双层膜，二是内含胞浆成分，如线粒体、内质网碎片等。步骤3：自噬体形成后，可与细胞内吞的吞噬泡、吞饮泡和内体融合（加了个“可”字，意思是这种情况不是必然要发生的）。步骤4：自噬体与溶酶体融合形成autolysosome，（自噬溶酶体的成熟：运输,融合,酸化)期间自噬体的内膜被溶酶体酶降解，2者的内容物合为一体，自噬体中的“货物”也被降解，产物（氨基酸、脂肪酸等）被输送到胞浆中，供细胞重新利用，而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中 * 自噬在细胞中受到严密调控, 使其能正常发挥维