氟喹诺酮类药物的分析.pptVIP

HPLC determination of enoxacin, ciprofloxacin, norfloxacin and ofloxacin with photoinduced fluorimetric (PIF) detection and multiemission scanning: Application to urine and serum? High-performance liquid chromatographic determination of ciprofloxacin in plasma samples? Separation and determination of synthetic impurities of norfloxacin by reversed-phase high performance liquid chromatography? Development and validation of an HPLC method for the determination of gatifloxacin stability in human plasma? * * 氟喹诺酮类药物的分析 药学院药物分析教研室 【大纲要求】 1、掌握氟喹诺酮类代表药物的体内过程 2、熟悉氟喹诺酮类代表的体内分析方法 Norfloxacin Lomefloxacin Ciprofloxacin Ofloxacin 主要代表药物 理化性质 ◆ ◆ 酸碱两性 易氧化性 ◆ 紫外吸收特性 ◆ 氟的特征反应 体内过程 ◆ 口腹容易吸收，半衰期较短，达峰时间较快 ◆ 在体内容易发生Ⅱ相代谢，与UDPGE结合 ◆ 体内分布广泛，血清蛋白结合率低，可进入各种组织 主要的分析方法 紫外分光光光度法 电化学分析 荧光分析 高效液相色谱分析 核磁共振技术 液相色谱与质谱联用 高效毛细管电泳 △A法测定尿中的诺氟沙星 基本原理：利用NFLX在酸碱中的紫外吸收差值，其中以碱性情况下的尿液维样品测定液，以酸性情况下的尿液为参比，在285 nm处测定不同条件下的吸收度差值，进而计算含量的一种方法。 △A=0.0447C+0.0808 (r=0.9971) Recovery=97.6%, RSD=4.7% 电化学分析 库仑滴定法 电导滴定法 电位滴定法 永停滴定法 利用化合物中的特殊基团，在一定条件下产生具有还原性的峰电位，峰高与样品浓度成比例关系。 荧光分析 Exciting wavelength: 276 nm Emission wavelength: 447 nm C=0.06125F-0.007793 (r=0.9998) Recovery=98.79% RSD=1.37% 高效液相色谱分析 ◆ ◆ ◆ ◆ 该类化合物具有容易解离的-COOH和N，故此需要例子对试剂作为流动相。RP-IP-HPLC 该类化合物具有较好的UV和荧光吸收特性，可以采用UV和FD。 由于生物样本较为复杂，故往往需要一定的前处理手段。 可以采用更灵敏的MS作为检测器。 HPLC法同时测定血浆中的4种氟喹诺酮类化合物 Column: Hypersil C18 (100 × 2 mm, I.D., 5μm) 流动相：CH3CN－磷酸盐缓冲液（10 mmol/l NaH2 PO4、10 mmol/l SDS、5 mmol/l 溴化四丁基铵，pH= 2.0）＝25 75 流速：0.5 ml/min FD: 280/418 nm 血浆样品 HClO4 加入内标 10000 rpm 上清液进样 Chromatogram Peak area and retention time IS ENX AFLX NFLX 测定结果与方法学 RSD≤8.0% 日内和日间 Linear range: 0.1~5μg/ml、0.025~1μg/ml、0.025~5μg/ml LOQ: 100 ng/ml、10 ng/ml、20ng/ml 环丙沙星及其代谢物的HPLC分析检测 Chromatographic conditions: Spheri ODS (250 × 4.6 mm, I.D., 5μ m) Guard column: Bondapak C18 Mobile-phase: 0.1 mol/l KH2PO4-CH3CN Gradient elution mode Time A B 0~20 min 20~25 min 70%~50% 50%~70% 30%~50% 50%~30% 血浆样品 CH3CN 加入内标 10000 rpm 上清液 Chromatogram Peak area