第1.1节：DNA重组技术的基本工具.pptVIP

酶 作用 限制酶 DNA水解酶 DNA解旋酶 限制性内切酶与DNA水解酶、DNA解旋酶的区别 将DNA两条链的氢键打开形成两条单链 切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键，形成片段的DNA. 切割磷酸二酯键，形成单个的脱氧核糖核苷酸。 把被限制酶切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将两个脱氧核糖核苷酸连接起来催化形成磷酸二酯键。 1．作用： 把被限制酶切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将两个脱氧核糖核苷酸连接起来催化形成磷酸二酯键。 1．作用： 两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来 例如：E·coli DNA连接酶 2．种类： 大肠杆菌 互补的 黏性末端 噬菌体 黏性末端 平末端 连接平末端需要用什么连接酶？ T4 DNA连接酶 E.coliDNA连接酶：只能连接黏性末端之间。 T4DNA连接酶：既连接黏性末端，又连接平末端。 例如：T4DNA连接酶 形成重组DNA分子。 3．结果： ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 生物A基因片段 生物B基因片段 ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 不同来源的DNA片段混合（E.coliDNA连接酶） 同一种内切酶（EcoRⅠ内切酶） ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 限制酶与DNA连接酶的关系： ①限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 ②DNA连接酶起作用时不需要模板。 * 专题一： 基因工程的产物： 多彩小鱼 转基因小鼠 转基因小猪 辣椒香蕉 蓝色玫瑰 黑籽番茄 基因工程的产物： 蓝色素基因 三色紫罗兰 白玫瑰 导入 目的基因 受体细胞 技术：基因工程 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。 基因工程的别名 __________________ 操作环境 生物体外 操作对象 ____________ 操作水平 __________________ 操作过程 __________________ 实质 ____________ 结果 DNA重组技术/基因拼接技术 基因 DNA分子水平 基因重组 剪切→拼接→导入→表达 新的生物类型和生物产品 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 达尔文提出生物进化论 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 孟德尔提出基因的分离定律和自由组合定律 早期基础理论 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 摩尔根证明基因在染色体上， 并提出基因的连锁互换定律。 早期基础理论 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 艾弗里证明DNA是主要遗传物质，DNA可 从一种生物个体转移到另一种生物个体。 早期基础理论 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 沃森、克里克提出DNA的双螺旋结构模型。 早期基础理论 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 梅塞尔松、斯塔尔证明DNA的半保留复制 早期基础理论 克里克等提出中心法则 DNA RNA 蛋白质 转录 翻译 逆转录 复制 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 1963年尼伦伯格和马太破译编码氨基酸的 遗传密码，1966年霍拉纳用实验加以证明。 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 科技探索之路： 1)基因转移载体的发现 2)工具酶的发现 3)DNA合成和测序技术的发明 4)DNA体外重组的实现 5)重组DNA表达实验的成功 6)第一例转基因动物问世 7)PCR技术的发明 问题探讨： 苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 普通棉花　　抗虫棉 想一想：完成抗虫棉的培育，需要哪些关键工作？ 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 提取 抗虫基因 通过运载体导入 转基因棉花含抗虫基因 转基因棉花有抗虫特性 苏云金芽孢杆菌 转基因棉花产生伴胞晶体 思考：在以上过程中关键步骤或难点是什么？ 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与棉花DNA“缝合” 关键步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子手术刀”—— “分子缝合针”—— “分子运输车”—— 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 载体 (1)“分子手术刀”—— (2)“