食品微生物检验论文初稿(5.17完成).docVIP

生菜中菌落总数及大肠菌群的检验 摘要：本实验采用GB47892-2010的检测方法测定未经清洗的生菜中的细菌总数，结果显示，实验用生菜表面细菌总数为3.35*1010个。采用GB/T4789.3-2010的检测方法测定生菜中的大肠菌群MPN，实验测得每克生菜中大肠菌群为20MPN。因此，生菜在没有洗净前的菌落总数和大肠菌群是很多的，人们食用前一定要洗净或煮熟。 关键词：生菜 菌落总数 大肠菌群 MPN计数法 前 言 我国的食品卫生微生物标准体系主要由菌落总数、大肠菌群和致病菌三大类构成。菌落总数，是指一定数量或面积的食品样品，在一定条件下进行细菌培养，使每个活菌只能形成一个肉眼可见的菌落，然后进行菌落计数所得的菌落数量。通常以1g或1ml或1cm2样品中所含的菌落数目来表现[1]。食品中菌落总数的测定一般采用平板菌落计数法。 大肠菌群是指在37℃，24h内能够发酵乳糖产酸产气的需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌;大肠菌群作为粪便污染指示菌，既是细菌总量指数—菌落总数的一部分，又与肠道致病菌之间有着密切的相关性，因此大肠菌群在食品微生物指标体系中占有举足轻重的地位。大肠菌群数量一般有两种表示方法，大肠菌群MPN与大肠菌群菌落数。大肠菌群MPN是基于泊松分布的一种间接计数方法[2]。 鲜切生菜是指以新鲜生菜(Lactuca sativa L.)为原料，经清洗、切丝、包装等加工过程，再经冷藏运输而进入配送中心或超市冷柜销售或快餐食品企业的即食产品。近些年来，随着西餐在国内市场上的快速发展，鲜切生菜受到我国消费者的欢迎。然而，鲜切生菜是经过种植、加工、配送等诸多步骤才进入到消费环节的，整个过程中任何一个步骤受到污染，都会对消费者的健康造成潜在危害，国外已有因食用鲜切生菜致病的相关案例报道。尽管我国尚未有因食用鲜切生菜而发生集体性安全事件，但其潜在的危害性与严重性后果需要引起重视。 1 材料与方法 1.1实验材料 1.1.1仪器设备 恒温培养箱：36℃±1℃ 移液枪和1mL无菌枪头、天平、锥形瓶、培养皿、试管、高压灭菌锅、 pH试、放大镜 1.1.2试剂药品 生菜（样品）、PCA培养基、月桂集硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤、煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤、无菌生理盐水、5%盐酸、10%氢氧化钠 1.1.3培养基 PCA培养基：胰蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、琼脂、水，PH7.0±0.2 月桂集硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤：胰蛋白胨、氯化钠、乳糖、磷酸氢二 钾、磷酸二钾氢无菌水 煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤：蛋白胨、乳糖、牛胆粉、0.1％煌绿水溶液、无菌水、葡萄糖 1.2培养基的配置及灭菌 按要求配置无菌生理盐水（90锥形瓶带玻璃珠1瓶，9ml试管10支），PCA培养基（200ml锥形瓶1瓶），LST肉汤培养基（10ml试管20支，注意加小倒管），BGLB肉汤培养基（5ml试管15支，注意加小倒管） 在121℃条件下，高压蒸汽锅灭菌15min。 1.3细菌总数的检测 1.3.1检验程序 菌落总数的平板计数法检验程序见图1。 图1 菌落总数的检验程序 1.3.2操作步骤 （1） 用灭菌的培养皿称取10g样品（生菜），置于盛90mL蒸馏水的无菌三角瓶内，充分混匀，制成1：10的样品匀液。 （2） 用1mL无菌吸管或微量移液管吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。反复稀释，制备10倍系列稀释样品匀液。 （3） 根据对样品污染状况的估计，选择稀释度为10的-8，-7，-6次方的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液加入两个无菌平皿内。同时取1mL稀释液加入一个无菌平皿做空白对照，还有一个暴露在空气中的对照。 （4） 及时将15mL~20mL冷却至适合温度的平板计数培养基倾注平皿，并水平摇晃平皿使其混合均匀。 （5） 琼脂凝固后，将平板翻转，36±1℃ 培养48±2h。 （6） 肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。 1.4大肠菌群的检测 1.4.1大肠菌群MPN检测程序 大肠菌群MPN计数的检验程序见图2 图2 大肠菌群 MPN 计数法检验程序 1.4.2操作步骤 （1）用灭菌的培养皿称取10g样品，置于盛90mL蒸馏水的无菌三角瓶内，充分混匀，制成1：10的样品匀液。 （2）大肠菌群初发酵 根据样品污染情况，另外选择三个合适的连续稀释度（-1，-2，-3次方）的样品匀液，每个稀释度接种3管LST，每管接种1mL，同时取1mL稀释液加入一个LST肉汤作为空白对照。 每个已接种管放置36±1℃培养24±2h，观察导管内是否有气饱产