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肌酸激酶测定试剂（CK-NAC） （NAC激活法） 一、用途 本试剂适用于人血清或血浆中肌酸激酶活力的体外定量分析。 二、临床意义 CK存在于心肌、脑和骨骼肌，这些组织受损或发生疾病时，会导致血清肌酸激酶水平的升高。CK有三种同工酶，最常测定的是CK-MB。当发生心梗时，它就显著升高。 三、方法学原理 CK 磷酸肌酸+ ADP → 肌酸+ ATP HK ATP +D-葡萄糖 → 6-磷酸葡糖 + ADP G6PDH 6-磷酸葡糖+NADP+→6-磷酸葡糖酸+NADPH+H+ 以NADPH在340nm波长吸光度增加计算CK活力。 四、试剂组成 试剂1（R1） 咪唑缓冲液 30mmol/L 醋酸镁 100mmol/L AMP 5mmol/L NADP 30mmol/L ADP 2mmol/L 葡萄糖 20mmol/L G-6-PDH 2500U/L HK 3000U/L EDTA 2mmol/L AP5A 10umol/L 试剂2（R2） 磷酸肌酸 120mmol/L 五、适用仪器 ZYA-1006：适用于日立7060/7150、岛津7200/ 7300/8000全自动生化分析仪； ZYB-1006：适用于日立7170 A /7170、奥林巴斯AU400 /600/1000全自动生化分析； ZYC-1006：适用于日立7020全自动生化分析仪； ZYD-1006：适用于贝克曼CX系列全自动生化分析仪； ZYE-1006：适用于东芝全自动生化分析仪； TYA-1006、TYB-1006、TYC-1006：适用于其它全自动生化分析仪及各类半自动生化分析仪。 六、试剂贮存及稳定性 试剂自生产日期起2—8℃存放稳定12个月；R1、R2按4:1比例混为工作液2—8℃可稳定15天。 七、标本要求 血清或血浆标本，均不应溶血。血浆只能用肝素、EDTA和氟化物抗凝，柠檬酸盐对测定产生干扰。 样品避光保存于室温CK可稳定4小时；在2—8℃保存可稳定1天；冷冻可稳定3天。 八、测定方法 1. 试剂准备 若双试剂检测，该试剂盒可直接使用，无需配制；若单试剂操作，将试剂1与试剂2按4:1比例混合即可。 2. 基本参数 温度 37℃ 样品用量 40ul 波长 340nm 试剂用量 1.0ml 吸光度 0—2A 延迟时间 120秒 光径 1cm 测定时间 120秒 F值 4180 3. 测定 a. 半自动及单一试剂的全自动测定 按需要量将R1、R2以4:1比例配制工作液，平衡至测定温度。 加入物 空白管 测定管 DH2O 40ul － 标本 － 40ul 工作液 1.0ml 1.0ml 混匀，37℃延迟时间120秒，测定时间120秒，测定△A/分。 b. 双试剂全自动生化仪测定 加入物 空白管 测定管 DH2O 10ul － 标本 － 10ul R1 200ul 200ul 混匀，37℃恒温3分钟 R2 50ul 50ul 混匀，37℃延迟时间120秒，测定时间120秒，测定△A/分。 4. 结果计算 CK (U/L)=△A/分×F Vt F=——————×103 Vs×ε×L Vt = 反应液总体积（ul） Vs = 样本体积 （ul） L = 比色杯光径（cm） ε= NADPH在340nm处的毫摩尔吸光系数，为6.22 CK（U/L）=△A/分×4180 （单试剂、双试剂，光径1cm） 九、试剂性能 1. 线性范围：0—1000U/L 2. 精密度：批内瓶间差CV≤4.5% 批间差CV≤5.9% 3. 准确度：以国际公认的质控血清（如Roche公司生产的质控血清）为检测样本时，测定值在质控血清规定的可接受范围内。 4. 空白吸光度：A340nm≤0.600A 十、注意事项 1. 可根据仪器要求按比例改变标本、试剂用量。 2. 空白A340nm大于0.600A时请勿使用。 3. 建议每次实验皆做空白管。 4. 生化仪光径不为1cm时，依公式计算F值。 十一、参考值 男 24—195U/L 女 24—170U/L 建议各实验室建立自己的参考值范围。