乳酸菌活性测定具体操作步骤.docVIP

乳酸菌活性测定具体操作步骤 一、培养基的配制： 改良TJA培养基(改良番茄汁琼脂培养基)番茄汁50mL 酵母抽提液5g 肉膏 10g 乳糖20g 葡萄糖2gK2HPO4 2g 吐温80 1g 乙酸钠5g 琼脂 15g 水加至.1000mLpH6.8±0.2（用10mol/l的氢氧化钠调节） 番茄汁的制作：将新鲜番茄洗净，切碎(切勿捣碎)，放入三角烧瓶，置4℃冰箱8～12h，取出后用纱布过滤即成。如一次使用不完，可将其置入0℃冰箱，可保存四个月。使用时让其在常温下自然溶解。制法：将所有成分加入蒸馏水中，加热溶解，校正pH6.8±0.2。分装烧瓶，高压灭菌121℃ 15～min。临用时加热熔化琼脂，冷至50℃时使用。器材lm1无菌管，无菌平皿，试管，试管架，恒温培养箱等操作步骤l．编号 2/3 2/3 2/3 2/3 2/3 2/3 2/3 注：酸奶由一个组成员做即可，酸奶稀释倍数要做到10-8。平板上还需标明班级，组号，样品种类（分瓶中和管内）。其中倒平板时酸奶做6、7、8三个梯度，酸奶粉做2、3、4三个梯度（根据具体情况定）。酸奶粉做2个平行，原酸奶做3个平行。 2．10-1试管将10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀10-1标号 无菌生理盐水中配成1：10的均匀稀释液。 3、稀释 用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的(待测样品) 沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的10-2试管内 (注意吸管尖端不要触及管内稀释液)另取1mL灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1mL灭菌吸管放菌液时吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液，否则稀释不精确，结果误差较大。取样用三支1mL无菌吸管分别吸取10-4和10-5的稀释菌悬液各lmL，对号放入编好号的无菌平皿中，每个平皿放倒平板．稀释液移入平皿后，应及时将冷至50℃的改良TJA注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。1mL稀释液检样用的灭菌生理盐水作空白对照，以上整个操作自培养物加入培养皿开始至接种结束须在20min待培养基凝固后，将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养培养72±3h。浇混接种涂布接种观察乳酸菌菌落特征，选取菌落数在30～300之间的平板进行计数。则1mL检样中乳酸菌数为：N1、N2、N3-------平行平皿中乳酸菌落个数 A--------稀释倍数（如选取的是10-2的平板中的菌落数，则A=100） 注：由于时间原因，此次试验只需数培养皿中菌落的个数，然后对比1ml酸奶和1g奶粉中乳酸菌的含量。