微生物分子生态学研究方法剖析.ppt

微生物分子生态学的一些研究方法 微生物群落结构和多样性是微生物生态学研究的热点内容。 20世纪70年代以前：传统的培养分离方法，依靠形态学、培养特征、生理生化特性的比较进行分类鉴定和计数，认识是不全面和有选择性的，方法的分辨水平低。 3、生物标记物法（Biomakers ） 生物标记物通常是微生物细胞的生化组成成分，其总量通常与相应生物量呈正相关。 特定的标记物标志着特定的微生物，一些生物标记物的组成模式(种类、数量和相对比例)可作为指纹估价微生物群落结构。 首先使用一种合适的提取剂直接把生物标记物从环境中提取出来，然后对提取物进行纯化，后用合适的仪器加以定量测定。 磷脂是构成生物细胞膜的主要成分，约占细胞干重的5%。在细胞死亡时，细胞膜很快被降解，磷脂脂肪酸被迅速的代谢掉，因此它只在活细胞中存在，十分适合于微生物群落的动态监测。 4. ERIC (肠杆菌基因间保守重复序列) -PCR指纹图谱技术 Di Giovanni 等用ERIC-PCR分析6种纯菌组成的混合菌的组成，获得了高重复性的指纹图谱，比常规RAPD-PCR相比更能反映菌群的组成特征。 5. 以PCR为基础的rRNA及rDNA的分析方法 实验原理 16S rDNA是基因组的“biomarker” – 核糖体RNA是蛋白质合成必需的，16S rDNA广泛存在于所有原核生物的基因组中。