微生物基因工程剖析.ppt

10 微生物基因工程 10.1 细菌基因工程 10.2 酵母菌基因工程 10.3 其他微生物系统 10.4 微生物基因工程的应用 10.1 细菌基因工程 实现外源基因表达的基本操作 大肠杆菌基因工程菌的构建策略 基因工程菌遗传不稳定性及其对策 实现外源基因表达的基本操作 启动子选择 pLac:乳糖操纵子 λ噬菌体转录启动子PL、PR? T7启动子 pBAD:阿拉伯糖操纵子 Trp启动子 密码子的偏好性 大肠杆菌基因工程菌的构建策略 （1）包涵体型异源蛋白质的表达 （2）分泌型异源蛋白质的表达 （3）融合型异源蛋白质的表达 （1）包涵体型异源蛋白质的表达 异源蛋白分离易达到高纯度和高浓度； 异源蛋白的稳定性取决于包涵体的形成速度； 异源蛋白以包涵体形式存在无活性，适合毒性蛋白表达。 （2）分泌型异源蛋白质的表达 具备信号肽，周质内蛋白量较少，利于浓缩和纯化； 周质内蛋白酶种类和量少，利于异源蛋白的稳定； 周质微环境处于氧化态，利于二硫键形成和蛋白质折叠； 有利于去掉N端Met，提高蛋白活性。 （3）融合型异源蛋白质的表达 稳定性大大增加； 分离纯化简单； 表达效率高 基因工程菌遗传不稳定性 重组DNA分子上某一区域发生缺失、重排或修饰 重组分子不稳定，使部分子代细胞不带质粒 10.2