第十七次课.pptVIP

液相色谱仪器 流动相中气泡？ 原因 危害 脱气 (3)梯度淋洗装置 3 高效分离柱 液相色谱检测器 b. 光电二极管阵列检测器 光电二极管阵列检测器 c. 示差折光检测器（differential refractive index detector） 示差折光检测器 思考题 1．提高液相色谱中柱效的最有效途径是什么？ 2. 何谓反相液相色谱？何谓正相液相色谱？ 3. 在液相色谱法中，梯度淋洗适用于分离何种试样？ 4．什么是化学键合固定相？它的突出优点是什么？ 5．什么叫梯度洗脱？它与气相色谱中的程序升温有何异同？ 6.指出下列各种色谱法，最适宜分离的物质。 （l）气液色谱；(2) 正相色谱；（3）反相色谱；（4）离子交换色谱;（5）凝胶色谱；(6）气固色谱；(7）液固色谱。 除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比； 通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）； 灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱； 偏转式、反射式和干涉型三种； * 主讲教师：陈 燕 舞 High Performance Liquid Chromatograph 理解HPLC的特点 掌握HPLC的流程 理解HPLC主要部件的结构 掌握常用HPLC的使用及维护 掌握HPLC的主要类型及选择 掌握HPLC实验技术 学习目标 室温 液体或各种液体的混合 高沸点、高分子、热 不稳定化合物及生化试样 HPLC 高温 几种“惰性”气体 气体 低沸点的稳定化合物 GC 操作温度 流动相 分析对象及范围 方法 HPLC与GC的比较 HP1100 (1)流动相贮存器 超声波振荡；惰性气体鼓泡吹扫脱气；真空脱气。 流速 不稳、基线 起伏、噪音峰 尖锐、检测器问题 氧气 空气 在线真空脱气和He脱气对保留时间再现性的影响 (2)输液泵 基本要求 1 流速稳定 2 流量可调 3 耐高压 4 死体积小 5 耐腐蚀 外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 2 进样装置 耐高压的六通阀进样装置 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 a. 紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点：灵敏度高； 线形范围高；流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。 紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 *