亚洲棉开花调控基因FLOWERINGLOCUSD(GaFD)的克隆和)材料.ppt

背景介绍 AtbZIP14/AtFD属于bZIP家族的A类亚家族，它是调节植物开花的基因，FD蛋白通过与成花素FT蛋白相互作用来调节开花途径，开花是高等植物由营养生长向生殖生长转变的一个重要生理过程，花的发育对作物的产量具有重要的影响，因此研究FD基因对植物的生长发育也是具有重要意义的。 亚洲棉开花调控基因FLOWERING LOCUS D (GaFD)的克隆和功能验证 生命科学学院 指导老师：黄先忠 申请人：高东禹 组员：刘建明、高东禹、张云超 * 目录 1.项目简介 2.研究目标 3.研究流程 4.关键问题 5.资料收集与研究成果 6.项目进度安排比较 7.目前项目进展状况 8.实验可继续进行的原因 项目简介 本课题主要对亚洲棉（Gossypium arboretum L.）bZIP转录因子蛋白家族进行聚类分析，克隆亚洲棉开花调控基因FIOWERING LOCUS D（GaFD），以及分析GaFD基因在拟南芥和野生烟草中的表达情况。 研究的目标 利用亚洲棉（Gossypium arboreum, A2）全基因组鸟枪（Whole-genome shotgun contigs, wgs）数据库，对棉花A2基因组上的bZIP基因家族进行聚类分析；克隆bZIP基因家族中的GaFD基因，并构建过量表达载体：p35S::GaFD；把GaFD基因导入野生型烟草与拟南芥中通过其表型来证明GaFD基因的功能;对GaFD与GhFD基因结构进行比较分析。 研究流程 对亚洲棉基因组上的bZIP蛋白家族进行聚类分析 从中比对分析出GaFD基因序列 GaFD基因的功能分析 提取亚洲棉顶端分生组织的RNA，反转录生成cDNA 以cDNA为模板扩增GaFD基因 载体构建：p35S::GaFD 拟南芥浸染 野生烟草 需要解决的关键问题 亚洲棉GaFD基因的确定及克隆（已完成）以及GaFD基因的功能验证。（未完） 资料收集与研究成果 已完成：亚洲棉bZIP转录因子的全基因组分析、对比分析出需要的GaFD基因；（完成） GaFD基因的克隆；（完成） 植物表达载体的构建：p35S::GaFD;（完成） GaFD基因与GhFD基因结构的区别；（完成） 正在完成：GaFD基因的功能验证。 * 目的基因的电泳图 Mark2000 750bp 目的基因：684bp * PMD18-T质粒(GaFD)酶切 * 35S::GaFD载体酶切图 * 2300::GaFD载体的PCR验证 菌液 GaFD基因与GhFD基因结构的区别 通过对比发现GaFD与GhFD基因结构相差不大，碱基数目与外显子数目相同，只是个别的碱基有所不同。 项目进度安排比较 1、2015年1月-2015年2月：查阅FD基因研究进展的相关文献，写好文献综述以及实验方案的设计; 2、2015年2-5月：亚洲棉bZIP转录因子的全基因组分析及分类； 3、2015年5月-7月：GaFD基因克隆及植物表达载体p35S:GaFD的构建； 4、2015年7月-9月：GaFD基因的功能验证； 5、2015年9月-12月，项目总结，撰写论文； * 目前项目进展状况 1.再生烟草实验：烟草叶片已浸染完成并进行筛选培养基培养，还需将其再生芽进行移植生根培养基中，之后培育成植株观察其表型。 2.拟南芥侵染实验：拟南芥处理完成并进行侵染，还需收获其种子利用卡纳培养基筛选之后培育成植株，观察植株的表型。 研究工作可继续进行的原因 1、雷蒙德氏棉的bZIP家族基因进行全基因组聚类分析已经完成； 2.实验室及生命科学学院具备本研究所需的仪器和设备，能保证本研究继续顺利进行;