植物染色体的人工加倍技术材料.pptVIP

* 二、技术原理 三、前期准备 四、多倍体的诱导 五、观察与鉴定 一、技术优势 技 术 优势 （1）克服杂种分离，缩短杂交育种年限 （2）排除显、隐性基因干扰，提高选择效率 （3）单倍体是诱变育种的良好材料 （4）能克服远缘杂交的不孕性，创造生物新类型 （5）利用单倍体对栽培品种进行纯化 植物染色体的人工加倍技术是一种新型育种方法，一般采用秋水仙素作为诱导剂，在植物细胞分裂的后期利用秋水仙素阻止纺锤体的形成，使已经纵裂的染色体在后期不能分开到两个子细胞中去，完成染色体加倍的加倍计划。 技 术 原 理 母本 父本 四倍体 二倍体 有籽西瓜 父本 母本 去雄授粉 普通西瓜植株 种下去 三倍体植株 无籽西瓜 花粉刺激 （提供生长素） 备用材料：萌动的玉米，黑麦，蚕豆种子 备用药品：秋水仙碱溶液（0.1%、0.05%），乙醇（95%，80%，70%） 用具：镊子，解剖剪，培养皿，吸水纸，指形管，烧杯，卡诺固定液，显微镜，显微测微尺，载玻片，盖玻片，镊子，烧杯，恒温水浴锅，吸水纸，1mol/L HCl ，1% I2-KI溶液，醋酸大丽紫，席夫试剂 前 期 准 备 多 倍 体 的 诱 导 秋水仙素：在多倍体诱导中因秋水仙素作诱导处理具有普遍有效 性和使用简便，危害小等优势而多被选用。 植物状态：同时为使秋水仙素处理达到较好效果，被处理的植物组织 当处于生长状态为宜，有尽可能多的细胞正处分裂过程中。为了减少二倍与多倍性组织嵌合现象的发生，被处理的组织数目越少越好。为此，通常是用秋水仙碱的稀溶液处理正在萌动的种子，幼芽。 处理方法：涂抹法，滴液法，注射法，喷雾法，熏蒸法，浸泡法等。 多 倍 体 的 诱 导 Ⅰ、玉米多倍体的诱导： 1 玉米种子催生发芽至芽长0.3-1.0cm 2 将1操作中的种芽放入含0.1%秋水仙素溶液的脱脂棉培养皿中，室 温下处理2-4d（20℃左右2-3d） 3 将处理后的种苗用清水冲洗2-3次，剪取根尖，用卡诺液固定。 4 剪除根尖和未剪除根尖的种苗继续用流水冲洗2-3h后播于实验实训地生长。观察记录 5 取未经处理的玉米种子在实验实训地中种植作为对照组，观察记录 多 倍 体 的 诱 导 Ⅱ、蚕豆多倍体的诱导： 1 将萌动的蚕豆种子浸在0.05%秋水仙素溶液中，置于25℃条件下处理24h。 2 用清水将秋水仙素处理后的种子冲洗1-3h，再将种子放到装有少许水并垫有两层吸水纸的培养皿内，上面盖两层的吸水纸，置25℃条件下培养。 3 待0根尖0.5-1.0cm时，剪下根尖，固定于卡诺液中。 4 将处理后的种子均播于试验地，观察记录。 5 取未经处理的蚕豆种子在实验实训地中种植作为对照组，观察记录 多 倍 体 的 诱 导 Ⅲ、黑麦多倍体的诱导： 1 将刚刚张口发芽的种子浸入到0.1%的秋水仙碱溶液中，在25℃下处理24小时。 2 用清水冲洗2h，将根尖剪下固定在卡诺液中取5株种苗用清水浸泡 24h。 3 将上处理过的植株用清水冲洗2h，均播于实验实训地，观察记录 Ⅰ 5 取未经处理的黑麦种子在实验实训地中种植作为对照组，观察记录 观 察 与 鉴 定 直接鉴定法：取被处理并固定的根尖，用植物根尖压片法制片，然后找中期图像，检查染色体数。如果要进行快速检查，可采用醋酸大丽紫染色法，如准备制成固定片，可采用席夫试剂染色法。 间接鉴定法：植物随着染色体数目的增加，某些组织器官的外形大小有相应增大的特征，这种被称为多倍体的巨大性。它主要表现在气孔、花器、花粉粒、果实、种子的增大，以及茎秆变粗，叶片加厚，花粉发芽孔增多等方面。除巨大性外，还普遍可以观察到单位叶面积上气孔数的变化，穗粒数的变化和株高变化等异常变化。 间接鉴定法 花粉粒大小的鉴定： 取经过加倍处理和对照的花粉（新鲜或固定的均可），涂于载玻片上，滴一滴1%I2-KI，加盖玻片，吸去多余染液，镜检并用显微镜测花粉粒的大小和观察花粉芽气孔数目。 气 孔 的 鉴 定： 撕下四倍体蚕豆、玉米叶的下表皮，用龙胆紫溶液染色1-2min，然后用水冲洗掉多余的溶液，将下表皮正面朝上平放在载玻片上，加盖玻片镜检。 *