3细胞培养和离心技术201410剖析.ppt

从组织中制备细胞核 细胞破碎：裂解缓冲液：0.25M蔗糖， 10mM Tris-HCl pH7.4, 10mM NaCl （低渗）, 3mM MgCl2, 1mM DTT, 0.5mM PMSF。 组织研磨器； 肝脏组织切成1cm3小块，装入缓冲液中，倒入研磨器 离心： 浓蔗糖溶液：2M蔗糖 组织匀浆产物和浓蔗糖溶液等体积混合 23 000g， 30min， 4°C(白色沉淀)，水平转头(SW) 6.举例:线粒体分离 原理： 线粒体特征：体积较大，沉降系数较大； 类似大小的细胞器较多，但密度有差别。 分离设计： 细胞破碎（机械匀浆） 差速离心，必要时密度梯度离心 （1）从大鼠肝脏组织中制备线粒体 细胞破碎：匀浆缓冲液（MS缓冲液，等渗） ：0.21M甘露糖 5mM Tris-HCl pH7.5, 70mM 蔗糖, 1mM EDTA Potter-Elve