细胞生物学-核糖体介绍.ppt

CELL BIOLOGY 第九章 核糖体(ribosome) 第一节 核糖体的类型与结构 根据沉降系数的不同分为70S和80S两种类型。 70S核糖体存在于细菌，线粒体和叶绿体中，80S 核糖体存在于真核生物的细胞质中。 40% 的蛋白质、60% 的RNA。 由大小两个亚基构成，只在以 mRNA 为模板合成蛋白质时才结合在一起，肽链合成终止后，大小亚单位又解离。 原核和真核细胞的 rRNA 都具有甲基化现象，甲基化与 RNA 转录后加工过程的酶识别有关，另外原核5S rRNA和真核5.8S rRNA结构高度保守，常用于研究生物进化。 二、核糖体的结构 1、离子交换树脂可分离纯化各种r蛋白； 2、纯化的r蛋白与纯化的 rRNA 进行核糖体的重组装，显示核糖体中r蛋白与 rRNA的结构关系： ?蛋白质结合到 rRNA 上具有先后层次性。 ?核糖体的重组装是自我装配过程 3、双功能的交联剂和双向电泳分离可用于研究 r 蛋白在结构上的相互关系 ?同一生物中不同种类的 r 蛋白的一级结构均不相同，在免疫学上几乎没有同源性。 ?不同生物同一种类 r 蛋白之间具有很高的同源性， 并在进化上非常保守。 4、电镜负染色与免疫标记技术结合，研究r蛋白在核糖体的亚单位上的定位。 5、对rRNA，特别是对16S rRNA结构的研究 ?16SrRNA的一级结构是非常保守的 ?16SrRNA的二级结构具有更高的保守性： 臂环结构(stem-loop structure) ?rRNA臂环结构的三级结构模型 6、70S核糖体的小亚单位中rRNA与全部的r蛋白关系的空间模型 ※ 双向电泳（Two-dimensional（2D） gel electrophoresis）是一项基于蛋白的两种不同特性：电荷和质量来分离蛋白的技术。首先基于蛋白固有电荷，通过等电聚焦（isoelectric focusing IEF）进行第一向蛋白分离，然后根据蛋白的质量，在第二向中通过SDS电泳进行蛋白分离。 （二）蛋白质合成过程中很多重要步 骤与50S核糖体大亚单位相关 ?涉及的多数因子为G蛋白(具有GTPase活性)，核糖体上与之相关位点称为GTPase相关位点。 ?最近人们成功地制备L11-rRNA复合物的晶体，获得了其空间结构高分辨率的三维图象。 ?这一结果证实了前人用各种实验技术所获得的种种结论 ?提出直观、可靠且比人们的预料更为精巧复杂和可能的作用机制，从 而为揭开核糖体这一具有30多亿年历史的古老的高度复杂的分子机器 的运转奥秘迈出了极重要的一步。 ?与mRNA的结合位点 ?与新掺入的氨酰-tRNA的结合位点——氨酰基位点，又称A位点。 ?与延伸中的肽酰-tRNA的结合位点——肽酰基位点，又称P位点。 ?肽酰转移后与即将释放的tRNA的结合位点——E位点(exit site)。 ?与肽酰tRNA从A位点转移到P位点有关的转移酶(即延伸因子EF-G)的结合位点 ?肽酰转移酶的催化位点 ?与蛋白质合成有关的其它起始因子、延伸因子和终止因子的结合位点 （二）在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性研究 ?很难确定哪一种蛋白具有催化功能： 在 E.coli 中核糖体蛋白突变甚至缺失并不完全抑制蛋白质合成。 ?多数抗蛋白质合成抑制剂的突变株，并非由于 r 蛋白的基因突变而往往是 rRNA 基因突变。 ?在整个进化过程中 rRNA 的结构比核糖体蛋白的结构具有更高的保守性。 rRNA 可能具有更重要的作用。 2、在核糖体中 rRNA 是起主要作用的结构成分 ?具有肽酰转移酶的活性； ?为 tRNA 提供结合位点(A位点、P位点和E位点)； ?为多种蛋白质合成因子提供结合位点； ?在蛋白质合成起始时参与同 mRNA 选择性地结合以及在肽链的延伸中与mRNA 结合； ?核糖体大小亚单位的结合、校正阅读（proofreading）、无意义链或框架漂移的校正、以及抗菌素的作用等都与 rRNA 有关。 3、r 蛋白质的主要功能 ?对 rRNA 折叠成有功能的三维结构是十分重要的； ?在蛋白质合成中，某些 r 蛋白可能对核糖体的构象起“微调”作用； ?在核糖体的结合位点上甚至可能在催化作用中， 核糖体蛋白与 rRNA 共同行使功能。 第二节 多聚核糖体与蛋白质的合成  ?概念 核糖体在细胞内并不是单个独立地执行功能，而是由多个甚至几十个核糖体串连在一条 mRNA 分子上高效地进行肽链的合成，这种具有特殊功能与形态结构的核糖体与 mRNA 的聚合体称为多聚核糖体。? ?多聚核糖体的生物学意义