第七章酶的非水相说课.pptVIP

第七章 酶的非水相催化 Contents 第一节 酶非水相催化的研究概况 研究背景： 1.观点上的误解： 有机溶剂使酶失去天然结构（native structure)和催化活性(catalytic activity)。 2.大多数酶在水中溶解度较小，水还能引起一些副反应，造成有机化合物的水解、消旋、聚合和分解等现象，同时许多反应的热力学平衡和产物回收也不令人满意。 .  开端： 美国 麻省理工学院 Zaks A和 Klibanov A.M 1984 年 Science 上发表文章。开辟了非水酶学。促进了生物催化反应的溶剂工程。 非水介质包括： 有机溶剂系统、超临界流体系统、气相体系、低共熔和共相混合体系 非水相的特点 1．有利于疏水性底物的反应。 2． 可提高酶的热稳定性。 3． 能催化在水中不能进行的反应。 4． 可改变反应平衡移动方向。 5． 可控制底物专一性。 6． 可防止由水引起的副反应。 7． 可扩大反应pH值的适应性。 8． 酶易于实现固定化。 9． 酶和产物易于回收。 10. 可避免微生物污染。 酶非水相催化的几种类型 气相介质中的酶催化 酶在气相介质中进行的催化反应。适用于底物是气体或者能够转化为气体的物质的酶催化反应。 由于气体介质的密度低，扩散容易，因此酶在气相中的催化作用与在水溶液中的催化作用有明显的不同特点。 超临界介质中的酶催化 酶在超临界流体中进行的催化反应。超临界流体是指温度和压力超过某物质超临界点的流体 离子液介质中的酶催化 酶在离子液中进行的催化作用。离子液（ionic liquids）是由有机阳离子与有机（无机）阴离子构成的在室温条件下呈液态的低熔点盐类，挥发性低、稳定性好。酶在离子液中的催化作用具有良好的稳定性和区域选择性、立体选择性、键选择性等显著特点。 常见的阳离子有季铵盐离子、季鏻盐离子、咪唑盐离子和吡咯盐离子等，阴离子有卤素离子、四氟硼酸根离子、六氟磷酸根离子 第二节 水对非水相介质中酶催化的影响。 非水相系统中的含水量：结合水和溶剂水，包括了有机溶剂中所含的自由水、与酶粉水合的结合水以及固定化酶中固定化载体的结合水 一、水与酶的柔性： 水含量过低，酶的刚性大，柔性低，水含量高，酶柔性大而刚性低，两种情况都不利于酶结构的动力学刚性和热力学稳定性之间达到平衡。水起的作用类似于润滑剂和增塑剂的作用。 二、结合水 98％的水为溶剂水，只有结合在酶分子表面的少部分水才是结合水。而对酶结构和催化活性至关重要的结合水又称为必需水或结构水。 三、水活度 水对非水相中酶的催化的作用至关重要，但所需的含水量却由于酶的不同而有所差别。一般来说，在亲水性的溶剂中获得相同的催化活力所需要的含水量比在疏水中的含量要高，因为疏水性溶剂束缚系统中的水量要比亲水性溶剂少。而采用不同的载体的固定化酶表现最大催化活力所需要的含水量也不相同。因此应选择一个参数来表示水对非水相催化的影响。 采用水活度的原因 1.水活度可以直接反映体系中水分情况。而与体系中水的含量和有机溶剂的极性无关 2.微水相是由固相、液相、和气相组成的多相系统，平衡状态时各相的水活度相同。不受固定化载体的影响。 3.水活度容易测定，用反应体系平衡后的气相相对湿度来表示 定义： 水活度是指在一定的温度和压力下，反应体系中水的摩尔分数Хw与水活度系数γw的乘积。 AW＝ Хw× γw γw是溶剂活度系数，溶剂疏水性越大， γw越大。可以用溶剂－水混合物气液平衡进行计算，在低压(500kPa)条件下，水活度是气相中水的分压和同温度下纯水的蒸汽压的比值。 AW＝（Yw × p）/p0 Yw为气相中水的摩尔分数。 控制水活度的方法 1.将底物溶液和酶分别与一种无机盐的饱和溶液预平衡一定时间。以获得恒定的水活度，然后将其混合反应； 2.向干燥的反应物中直接加入水合盐，释放出的水进入体系中，盐水合物在一定的温度压力下建立平衡，给出恒定的水活度； 3.向经过脱水的干燥溶剂中添加定量的水； 4.使用根据Karl Fisher 方法原理建立的水活度仪 四、水对酶活力选择性调节 最佳水活度 AW＝0.55 有助于理解非水相中水对酶催化活力作用的本质，此外，水对酶的立体选择性也有一定的调节作用。 * 非水相酶反应的研究进展 1． 超临界流体中的酶反应 2． 仿水溶剂和印迹技术 1． 超临界流体中的酶反应 超临界流体的概念: 指温度和压力均在本身的临界点以上的高密度流体，具有和液体同样的凝聚力、溶解力；然而其扩散系数又接近于气体，是通常液体的近百倍。 超临界流体的有关性质 （1）超临界流体的P-V-T性质 超临界流体的有关性质 （2）所谓超临界CO2是指纯净的CO2被