第七章酶工程说课.ppt

学习目的 初步掌握酶的发酵生产和分离纯化的大致流程以及酶制剂的保存法。对酶的固定化、酶的修饰改造和主要的酶反应器类型有一定的认识。了解生物传感器及酶对现代人类生活的影响。  一、引 言 1、酶工程的发展趋势 随着生物技术的发展，酶工程将引起发酵工业和化学合成工业的巨大变革。21世纪酶工程的热点和前题，可能包括基因工程和蛋白质工程的应用，人工合成酶和模拟酶、核酸酶和抗体酶，分子酶学，酶的定向固定术，杂交酶，分子发动机，酶化学技术，非水酶学，糖生物学和糖基转移酶，酶标药物，端粒酶，极端环境微生物和不可培养微生物的新酶种， 酶在环境保护方面的应用等。 2、酶工程研究内容 二、酶的发酵生产 1、酶的来源 从动植物组织中分离提取 植物细胞培养产酶 动物细胞培养产酶 微生物发酵产酶 2、微生物作为酶生产来源的优点 生长繁殖快，生活周期短，产量高，酶比活很高； 培养方法简单，原料来源丰富，经济效益高； 微生物菌株种类繁多，酶的品种齐全； 可以通过诱导、诱变及基因工程等方法培育出新的产酶量高的菌种。 3、优良产酶菌种的筛选 （1） 优良的产酶菌种应具备的优点 繁殖快、产酶量高 能在便宜的底物上生长良好 产酶性能稳定、菌株不易退化 产生的酶容易分离纯化 （2）产酶菌种的筛选方法 筛选步骤 产酶菌株的检测 胞外酶的产酶菌株的检测 胞内酶的产酶菌株的检测 4、基因工程菌（细胞）的构建 构建基因工程菌的目标 改善原有酶的各种性能 扩充可安全使用的酶源 酶基因克隆及表达的基本步骤 能产生目的酶的生物  酶的纯化 总m RNA的纯化  测定N端部分氨基酸序列 mRNA 设计引物 RT-PCR  与合适的载体重组、重组子筛选与鉴定  转入工业生产用的宿主（工程菌或工程细胞），如米曲霉 酶的工业化生产 克隆酶基因的宿主-载体系统应具备的特性 所希望的酶占细胞总蛋白量的比例要高; 菌体容易大规模培养，生长无特殊要求； 载体与宿主相容，且能在宿主中稳定维持； 宿主的蛋白酶尽可能少； 宿主菌对人安全，不分泌毒素。 5、 微生物酶的发酵生产 （1）培养基 碳源 氮源 无机盐类 生长因子 pH值 （2） 酶的发酵生产方式 固体发酵法 液体深层发酵法 温度 通气和搅拌 pH值 （3 ） 提高酶产量的措施 添加诱导物 酶的作用底物 酶的反应产物 酶的底物类似物 降低阻遏物浓度 表面活性剂 添加产酶促进剂 6、酶的分离纯化 提取和分离纯化酶时一般应注意的条件 温度 pH值 盐浓度 搅拌 微生物污染　　 （1） 酶制剂的制备 破碎细胞 溶剂抽提 离心分离 浓缩 干燥 （2） 酶的纯化与精制 根据酶分子大小和形状的分离方法 离心分离 差速离心 速率区带离心 等密度梯度离心 介质的特性 类型 工作范围（相对分子质量） 床体积/（ml/g干胶） 葡聚糖凝胶