第十一章转基因动物技术研讨.ppt

* * * * * * * * * * * * 第十一章 基因转移技术 一、与基因转移技术相关的概念 生物技术（ biotechnology ）：是一项以生命科学为基础，利用生物体系和工程原理生产生物制品和创造新物种的综合性科学技术，又称生物工程。 基因工程（ genetic engineering ）：是指人们利用分子生物学技术和手段，操纵、改造和重建生物的基因组，从而使生物体的遗传性状发生定向变异。 二、基因转移的概念 基因转移（gene transfer）：借助基因工程技术将确定的外源基因通过生殖细胞或早期胚胎导入到动物体的染色体上，称为基因转移； 转基因动物（transgenic animal）：含有转基因的动物称为转基因动物。 转基因动物研究是基因工程技术 在动物育种中的一次革命！ Palmiter R. D. University of Washington 1982年，美国华盛顿大学，Palmiter 将大白鼠生长激素基因转移到小白鼠受精卵中，培育成一种个体比正常小白鼠大一倍的超级小鼠。 三、转基因动物的研究历史 朱作言 院士 中科院水生生物研究所 三、转基因动物的研究历史 mMT hCG 世界上首例 转基因鱼 2004年初，新加坡研制的转红色荧光蛋白基因斑马鱼获准进入美国宠物市场，成为世界上首个实现商品化的转基因鱼 三、转基因动物的研究历史 三、转基因动物的研究历史 四、转基因鱼的研究 （一）鱼类作为转基因研究的有利条件 （二）转基因鱼的构建 （三）外源基因转入鱼卵的方法 体外授精，特别是可以人工授精 鱼卵易得、数量多、卵径大、便于注入外源DNA 受精卵容易培养 发育速度快 （一）鱼类作为转基因研究的有利条件 （二）转基因鱼的构建 外源基因的结构 转基因鱼的构建 外源基因的结构 启动子（promoter）：mMT、SV40、RSV 编码序列（coding sequences）：GH、AFP 转录终止信号（transcriptional termination signal） 转基因鱼的构建 获得目的基因 从基因文库中得到一个含侧翼调控序列的合适的目的基因。侧翼调控序列包括位于基因编码序列上游的启动子及位于编码序列上游或下游的组织特异性增强子。 基因克隆 将获得的基因序列克隆到质粒或噬菌体中，并在合适的菌株中扩增。然后从培养的细菌中提取这种重组质粒或噬菌体DNA，用合适的限制性内切酶酶切分离出插入载体的外源基因序列。 转基因鱼的构建 受体鱼（受精卵）的获得 在鱼类繁殖季节，选取成熟的雌、雄鱼，注射垂体或激素催产，分别收集精液和卵子，干法授精。受精卵去膜，将裸卵移至Holtfreter溶液中，选取质好的裸卵移至手术杯中作基因转移。 转基因鱼的构建 注射基因 显微注射法是目前最常用和比较有效的基因导入的一种方法，经人工催产、授精，受精卵用镊子去膜或在0.25％-0.5％胰蛋白酶中处理3-5min，消化去膜，将裸卵移至Holtfreter溶液中，在第一次卵裂前进行显微注射操作导入外源基因。 转基因鱼的构建 注射后鱼卵的管理 转基因鱼的构建 （三）外源基因转入鱼卵的方法 显微注射法（microinjection） 电穿孔法（electroporation） 精子载体法（sperm-mediated gene transfer） 基因枪法 （particle gun） 1. 显微注射法（microinjection） 受体细胞主要是卵细胞，现在也用培养的贴壁细胞； 成功率与操作者的熟练程度有关； 主要用于转基因动物 2. 电穿孔法（electroporation） 在高压电场的瞬时作用下，细胞膜出现可逆的微小孔洞，外源DNA可以通过这些孔洞进入细胞内； 可用于真核、原核细胞的转染； 优点：简单、重复性好、转移率高； 缺点：对细胞有损伤 3.精子载体法（sperm-mediated gene transfer） 在受精过程中，精子能自动找到卵子中的雌核，其准确性之高远非至今任何精密仪器所能比拟。因此，精子是比较理想的基因导入的运载工具。该法又叫精子介导基因转移。 4.基因枪法（particle gun） 又称微抛物法或颗粒加速法（biolistics） 五、转基因鱼的应用潜力 ?快速育种 ?改良养殖性能 生产医药生物制品 思考题: 1、基因转移的概念？ 2、设计题：构建转基因鱼 《鱼类育种学》结业考试 时间：2010年6月22日（17周周二） 上午9:00-11:00 地点：三教A205 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *