第三章 核酸化学要点.pptVIP

3.DNA变性的特征 变性核酸将失去其部分或全部的生物活性。 变性改变了DNA的二级结构。核酸的变性并不涉及磷酸二酯键的断裂，所以它的一级结构(碱基顺序)保持不变。 DNA的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。 DNA解链温度 紫外吸收值明显增加，即增色效应。 粘度降低，沉降系数增加。 解链曲线：在连续加热DNA的过程中以温度对A260值作图，所得的曲线称为解链曲线。 Tm：紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm)。其大小与G+C含量成正比。 影响Tm值的因素 ① DNA的均一性：均一DNA（如病毒）的Tm值范围较小； ② DNA中G-C对的含量 ：分子中G和C的含量越高，越不易变性，Tm值越高。可通过经验公式计算： （G+C)%=(Tm-69.3) ×2.44 ③ 盐离子强度 ： Tm值随溶液盐浓度增加而增大； 一般DNA的Tm值在70-85?C之间， Tm值较低，易变性，不易保存 增色效应与减色效应 天然DNA分子在热变性条件下，双螺旋结构破坏，碱基暴露，在紫外光260nm波长处的吸收度明显增加，此现象称为增色效应。 变性DNA分子复性形成双螺旋结构时其紫外吸收降低的现象称为减色效应。 （二）DNA的复性 1.变性DNA在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构，其物理性质和生物活性随之恢复，这一过程称为复性； 2.对于热变性的DNA，在缓慢冷却的条件下可重新结合恢复双螺旋结构，称为退火。 3.DNA复性后，一系列性质将得到恢复，但是生物活性一般只能得到部分的恢复。 DNA的复性条件 1.将热变性的DNA骤然冷却至低温时，DNA不可能复性。即淬火。 2.将变性的DNA缓慢冷却时，可以复性。 退火温度＝Tm－25℃ 3.分子量越大复性越难。浓度越大，复性越容易。此外，DNA的复性需要一定的盐浓度，也与它本身的组成和结构有关。 高于Tm值5℃ 复性 也称退火 ① 样品的性质(G+C) ② DNA的浓度 ③ DNA片段的大小 ④ 温度 ⑤ 离子强度 影响复性的因素 （三）分子杂交 1.在变性的DNA溶液中加入外源DNA单链分子或RNA单链分子（与 原DNA具有同源性），去掉变性条件后复性形成双螺旋结构的过 程。 2.这样形成的新分子称为杂交DNA分子。 3.利用核酸杂交可检测特定的核苷酸片段或研究同源性等。 变性 复性 复性 Thanks! DNA双螺旋结构的要点 （1）DNA分子由两条多聚脱氧核糖核苷酸链(简称DNA单链)组成。两条链沿着同一根假象的中心轴平行盘绕，形成右手双螺旋结构。螺旋中的两条链方向相反，即其中一条链的方向为5′端→3′端，而另一条链的方向为3′端→5′端。 （2）由脱氧核糖和磷酸构成双螺旋的骨架，碱基位于螺旋的内侧，磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧。碱基平面与戊糖环平面互相垂直，碱基对平面彼此平行。 （3）螺旋横截面的直径约 为2nm，每条链相邻两个碱 基平面之间的距离为0.34 nm，每10个核苷酸形成一 个螺旋，其螺矩（即螺旋旋 转一圈的高度）为3.4 nm。 （4）维持两条DNA链相互结合的力是链 间碱基对形成的氢键。碱基结合具有严 格的配对规律:A与T结合，G与C结合， 这种配对关系，称为碱基互补。A和T之 间形成两个氢键，G与C之间形成三个氢 键。 在DNA分子中，嘌呤碱基的总数与嘧 啶碱基的总数相等。 （5）螺旋表面形成大沟(major groove)及小沟(minor groove)，彼 此相间排列。小沟较浅；大沟较深， 是蛋白质识别DNA碱基序列的基础。 （6）氢键维持双链横向稳定性，碱 基堆积力维持双链纵向稳定性。 2.0 nm 小沟 大沟 DNA的双螺旋结构稳定因素 ? 氢键 碱基堆积力 :分子中碱基的堆积可以使碱基之间缔合，形成了碱基堆积力。（主要作用力） ? 磷酸基上负电荷被胞内组蛋白或正离子中和 ? 碱基处于疏水环境中 3.DNA的三级结构---超螺旋 1.超螺旋是指双螺旋进一步 扭曲或再螺旋的构象。 2.正超螺旋（变紧，过旋） 和负超螺旋（变松，欠旋）。 3.人类46条染色体的DNA 总长可达1.7m，经过螺旋 化压缩，实际总长只有 200nm。 螺旋和超螺旋电话线 螺旋 超螺旋 4.染色质与染色体 真核生物中DNA双螺旋沿着组蛋白八聚体核心的短轴绕1.75圈，形成左手超螺旋，称核小体。 染色质的基本结构单位是核小体。 串珠状结构进一步卷曲形成螺线管，后者再进一步卷曲形成超螺旋管，形成染色单体。 核小体(nucleosome)： 由DNA和组蛋白构成。 DNA：以负超螺旋缠绕