酶工程1-3影响酶催化作用的因素讲述.pptVIP

§1-3 影响酶催化作用的因素 酶的催化作用受到底物浓度、酶浓度、温度、pH值、激活剂浓度、抑制剂浓度等诸多因素的影响。在酶的应用过程中，必须控制好各种环境条件，以充分发挥酶的催化功能。 1、底物浓度的影响 实验：1902年，Henri 在研究蔗糖酶水解蔗糖的反应中发现：在酶浓度恒定的条件下，随着底物浓度的增加，反应速度的上升呈双曲线，即：在低浓度底物时，反应速度呈直线上升，而在高浓度底物时，反应速度上升很少，甚至不再上升。 Henri：酶—底物中间复合物学说 在底物转变成产物之前，必须先与酶形成中间复合体，后者再转变成产物而重新释放出游离的酶。 M-M 方程的建立 1913年，Michaelis 和 Menten 对中间复合物学说提出四点假设，建立了酶催化反应的动力学方程----米氏方程（M-M方程）。 四点假设： ①反应中，酶的浓度保持恒定； ②酶的浓度远小于底物的浓度； ③产物的浓度很低，可以忽略其对反应的影响； ④生成产物的速度要慢于底物与酶生成复合物的可逆 反应速度，是整个反应速度的决定因素。 M-M 方程的修正 1925年，Brigg 和 Haldane 认为：许多酶有很大的催化能力，当[ES]形成后，即迅速转化成产物P而释放出酶，即当k+2k-1时，M-M 方程不成立。 提出：拟稳态法（B-H法） 四点假设： ①、②、③ 同“快速平衡法”； ④中间复合体[ES]在一开始浓度增高后，可在相当一段时间内保持浓度的恒定；在这段时间里，[ES]的生成速度和[ES]消失（包括分解成 E+S 和 E+P）的速度相等，达到动态的平衡，即“拟稳态”。 2、酶浓度的影响 在底物浓度足够高的条件下，酶催化反应速度与酶的浓度成正比：v = k cE 。 3、温度的影响 反应中，仅改变温度时，每升高 10oC ，化学反应速度增加1~2倍；但又因酶是生物大分子，其活性会随温度的升高而受影响，甚至变性失活（一般在 60oC 以上易失活，极少数酶的热稳定性很高）。 每一种酶的催化反应都有其最适宜的温度范围及最适温度。 添加酶的作用底物或者某些稳定剂可以适当提高酶的热稳定性。 4、pH值的影响 在不同的pH值条件下，酶分子和底物分子中的基团的解离状态发生改变，从而影响酶分子的构象以及酶与底物的结合能力和催化能力。 在极端的pH值条件下，酶分子的空间结构发生改变，从而引起酶的变性失活。 每种酶都有其各自的适宜pH值范围和最适pH值。 5、抑制剂的影响 抑制剂： 能够使酶的催化活性降低或者丧失的物质。 6、激活剂的影响 激活剂：能够增加酶的催化性或使酶的催化性显示出来的物质。亦称活化剂。 常见的激活剂： Ca2+、Mg2+、Co2+、Zn2+、Mn2+等金属离子； Cl- 、Br- 、 I- 、 CN- 、 PO43-等无机阴离子； 某些酶类等大分子（如：胰蛋白酶对天冬氨酸酶和对胰蛋白酶原） 激活剂对酶的作用具有一定的选择性，即一种激活剂对某种酶起激活作用，而对另一种酶可能起抑制作用；有时离子之间有拮抗作用；有时金属离子间也可互相替代。 * * Vm— 最大反应速度，v —反应速度， cS —底物浓度 ①直线： cS 较低时, v 与cS 成正比; ② 曲线： cS 达到一定的数值时, v 与cS 不再成正比; ③ 接近直线： cS 增大到极大值时, v 上升很少甚至不再上升(无限靠近Vm)。 Vm 0 cS ② ① ③ (双曲线形图) 可逆反应在反应一开始就快速达到平衡，“快速平衡学说” Vm 0 cS KS v —反应速度 Vm—最大反应速度 cS —底物浓度 cE — 酶浓度 cE0 — 初酶浓度 c[ES] — 酶浓度 KS—米氏常数 c[ES]不随时间而变化 t c cS 拟稳态 当k+2远小于k-1时，Km=Ks 为了纪念Michelis 和 Menten,把 M-M法和 B-H法 求得的方程都称为米氏方程！ cE v 0 竞争性抑制剂 非争性抑制剂 反争性抑制剂 不可逆抑制剂 可逆抑制剂 抑制剂 4 3 1 2 -1/Km 1/Vm -1/KmI -1/KIm 1/VmI(1/VIm) L— B 作图法 1 ： 无抑制 2 ：竞争性抑制 Vm不变，Km增大 3 ： 非竞争性拟制 Vm减小，Km不变 4 ：反竞争性抑制 Vm和Km同时减小 非 反 竞 *