利用肠黏膜活检物作抗原检测来诊断日本血吸虫病的方法研究.docVIP

附件4 湖南省大学生研究性学习和创新性实验计划 项　 目　 申　 报　 表 项目名称: 利用肠黏膜活检物作抗原检测来诊断日本血吸虫病的方法研究 学校名称 邵阳医学高等专科学校级1、主持项目“”（项目编号：，20-2010）。 、湖南省教育厅科学研究项目“”（项目编号：C1163，20-2013）。 项目研究和实验的目的：。 项目研究和实验的内容： 1.制备抗血吸虫毛蚴分泌抗原的IgY抗体是完成本实验的前提，能否达到预期目的这是关键和难点，其中获取高纯度的毛蚴分泌抗原就存在一定难度； 2.准确获取鼠模型的肠黏膜定量组织也是确保检测可靠的重要环节，否则会出现较大试验误差而影响结果。 国内外研究现状和发展动态 1 血吸虫的寄生习性 日本血吸虫（Schistosoma japonicum）成虫呈合抱状态寄生于人及多种哺乳动物的门脉-肠系膜静脉系统,雌虫在肠粘膜下层静脉末梢产卵,一部分虫卵随血液流入肝脏及结肠肠壁组织内形成虫卵结节,引起周围组织的炎症反应,导致肠壁组织坏死,形成囊肿;另一部分虫卵经肠壁进入肠腔,卵内成熟的毛蚴可将分泌物透过卵壳排出引起周围组织和血管内壁发炎坏死,虫卵最终随粪便排出体外[1-2]。 血吸虫与其宿主在长期进化的过程中形成了相当密切的关系,包括血吸虫为了自身的发育和分化而对宿主内分泌及免疫信号的利用,逃避宿主的免疫攻击等。对于血吸虫基本生命过程的研究可以使人们进一步了解该种寄生虫的性别分化、发育、成熟和行为活动的相关机制,并以此为基础在疾病诊断、药物治疗和疫苗的开发等方面取得新的研究进展。 2. 日本血吸虫病诊断方法的研究现状 诊断是确定血吸虫感染率以及感染度的有效手段，它不仅为流行区的划分提供判断标准,还为血吸虫病防治活动的各个环节提供必不可少的信息和科学依据，在防治工作中处于重要位置。无论从个体水平确定药物化疗的对象、考核化疗的效果,还是在群体水平监测血吸虫病疫情的变化、考核血吸虫病控制效果和评估流行趋势等等,均需要以诊断结果作为评判依据之一[3-4]。 传统的病原学方法（粪便检查）是诊断血吸虫病最为经典和可靠的途径，是判断血吸虫感染与否的“金标准”[5]。但是病原学方法工作强度大、诊断周期长，而且流行区人群的依从性逐年下降，收集病人粪便的难度不断增加。此外随着血吸虫病滴度流行区敏感性有限，粪便查出病原的难度增大[6-7]。因此单纯依靠病原学诊断方法已经不能适应大规模血吸虫病防治工作的需要。此外，在病原学诊断中还有临床常用的一种传统方法-直肠镜检法，用其对慢性血吸虫病诊断其到弥补粪检不足的作用，但是，还存在查见不到虫卵和虫卵死活难鉴别的困难而导致不少病人无法得到可靠诊断。建立利用该方法活检肠黏膜查抗原，预期可大大提高其诊断的敏感性和可靠性。 免疫学的诊断方法具有操作简便、敏感性较高、特异性较好和流行区群众的依从性较高等优点，已逐渐为广大血防工作人员以及流行区群众所接受，并且在流行区化疗对象的大规模筛查、血清流行病学调查以及防治效果的评价等方面起到了极为重要的作用[6,8-9]。目前，血吸虫病免疫诊断常用的方法主要包括三种常规检测方法：皮内试验（Intradermal test，ID）、间接血凝试验（Indirect haemagglutination test, IHA）、环卵沉淀试验（Circumoval precipitin test, COPT），同时还有酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）、免疫酶染色试验（Immunoper-oxidase stain test, IEST）、酶联免疫印迹技术（Enzyme-linked immunoblotting, ELIB）、胶体染料试纸条法（Dip stick dye immunoassay, DDIA）、斑点金免疫渗滤法（Dot immunogold filtration assay, DIGFA）等几种特异性检测方法。血吸虫病免疫诊断具有较高的敏感性，但是也存在与其他寄生虫感染存在交叉反应，影响诊断的特异性的问题。 目前，还有许多的免疫学诊断方法是检测病人血清中的循环抗体，但机体产生的抗体会在宿主体内存在较长的时间,感染者即使得到有效治疗,体内抗体仍维持较高的水平,不能区分现症感染和既往感染,不具备疗效考核的意义。 3.日本血吸虫分泌的抗原及鉴定的研究现状 血吸虫抗原在血吸虫病的免疫诊断、疫苗研究和致病机理方面有重要作用。目前，大多数的免疫诊断都是针对血吸虫病疑似患者的血清学检测，因此寻找和鉴定特异、敏感的诊断抗原是免疫学诊断技术发展的核心内容。随着分离纯化技术的不断提高，血吸虫病诊断抗原由最初的天然混合抗原（即血吸虫生活史中各虫期抗原）发展成为不同种类的组分抗原（纯化的优势诊断抗原