实验DNA重组与细胞转化(博)ppt.pptVIP

* 目的基因（c-myc基因片段）的获取 c-myc基因是myc基因家族的重要成员之一 c-myc基因与多种肿瘤发生发展有关 本实验采用的4.8kbc-myc基因位于2,3外显子区域 BamH I 和Xba I 双酶切处理 * 载体与目的基因的连接构建重组子 1. 平端连接 增加DNA浓度或提高连接酶浓度以提高连接效率 2. 粘端连接 效率较高，加入连接酶后可立即转化，即有转化子出现 3. 粘-平连接 * 连接酶的选择： T4 DNA连接酶：适用粘端、平端连接 可用于DNA-RNA，RNA-RNA杂交体 大肠杆菌DNA连接酶：适用粘端连接（也可用于平端，效率低） 连接温度： 一般12~16 ℃，也可提高温度到22 ℃ 载体与目的基因的比例： 摩尔比约1：1 ~ 1：5 * 转化：将异源DNA分子引入另一细胞，使受体细胞获得新的遗传性状。 感受态细胞：受体细胞经特殊方法（如电击、CaCl2等处理，细胞膜的通透性发生改变，允许带外源DNA的载体分子进入的状态，称之。 转化体的筛选：选择性培养基 如：Amp抗性平板 四、实验步骤（详见实验讲义） 1. 目的基因c-myc与pS