实验八亲和层析分离纯化蛋白质ppt.pptVIP

样品制备 待纯化蛋白：GST标记的纤维素酶 来源：重组大肠杆菌 提取方法：超声波破细胞释放GST-纤维素酶 条件：超声处理3秒，间歇5秒，共15分钟。 4000rpm离心5分钟，取上清（混合蛋白质溶液）上柱。 亲和层析分离纯化目标蛋白 实验目的 掌握GST亲和层析分离纯化目标蛋白的原理和实验方法（第一部分） 掌握SDS检测目标蛋白原理和方法（第二部分） 第一部分 GST亲和层析分离纯化目标蛋白 亲和层析原理 生物大分子与配体特异非共价可逆结合 酶-底物 酶-底物类似物（酶的竞争性抑制剂） 抗体-抗原 激素-受体 外源凝集素-多糖、糖蛋白、细胞表面受体 核酸-互补核苷酸序列（Oligo-dT） 亲和层析原理 GST亲合层析 谷胱甘肽硫转移酶（GST，26kd，与谷胱甘肽GSH特异结合） GSH作为配体，共价结合在葡聚糖上，（Sepharose 4B） GST融合目标蛋白 葡聚糖上的GSH与GST融合蛋白结合 用还原型GSH洗脱GST融合蛋白 GSH- Sepharose 4B GSH- Sepharose 4B GSH- Sepharose 4B 实验步骤 一、装GST柱 1、清洗和装好层析柱，封闭出口。 2、加入2 mL PBS。 3、取1 ml GSH- Sepharose 4B填料，加入柱子中。 4、打开柱子出口，使PBS缓慢流出。