第5章 食药用菌的发酵培养剖析.ppt

灵芝深层发酵，就是将菌丝培养在液体培养基中，在纯种条件下，强制送入无菌空气到密闭发酵罐中进行(搅拌)培养的方式，使灵芝菌丝生长、繁殖和代谢产物的生物合成。 灵芝深层发酵的优点 （1）生产周期短； （2）产量大，产品质量稳定； （3）成本低 二、深层发酵的灵芝菌丝体形态 菌丝体 菌丝球 菌丝的生长是辐射状的向四周扩展，液体培养基中在通气或振动作用下，菌体呈球形悬浮于发酵液中，称为菌丝球。 灵芝的菌丝球一般呈放射状，带有“毛刺” ，直径多在4—8mm左右。有的菌球表面光滑；有的表面粗糙．有的似刺毛球 三、影响灵芝深层培养的因素 （一）培养基： （1）碳源 葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉等。培养基中糖的浓度一般为2％，培养基中糖过量时．常阻碍氧气的溶解，不利于沉没菌丝体的生长。 （2）氮源 有机氮：蛋白胨、黄豆饼粉、花牛饼粉、玉米浆、酵母粉、鱼粉、蚕蛹粉等； 无机氮源：硫酸铵、尿素、氯化铵、硫酸铵、硝酸铵、硝酸钾等； 蛋白胨花生饼粉黄豆饼粉酵母粉硫酸铵硝酸钾 （3）碳氮比 碳氮比为20～25：1左右，因此灵芝发酵培养基碳源浓度应控制在2％～4％；氮源浓度应控制在0.1％～0.3％。 （二）培养条件 （1）温度 （2）pH值 （3）通气 （4）搅拌 （5）消泡 （6）菌种龄与接种量 （1）温度 最适温度：27—30℃； 温度范围：22—35℃； 极端温度：低于27℃菌丝生长缓慢；高于30℃则菌丝容易老化，随着时间延长菌丝逐渐趋于自溶，发酵液的颜色变得较深；36～38℃菌丝停止生长，40℃即死亡。 在发酵过程中，前期0～30小时以稍高的温度促进菌丝迅速生长，这样可缩短非生物合成的周期。在30～150小时以稍低的温度尽可能延长有效物质的分泌期。150小时以后，温度稍为提高，以刺激有效物质的分泌。后期提高温度会促使菌丝衰老较快，但因接近放罐、影响不大。 （2） pH值 最适pH值：5.0～6.0； 发酵初期pH 4.0～5.4左右，到了发酵中期菌丝体生长旺盛，菌体干物质和有效成分的积累，pH急剧下降到2.5～3.5之间，进入发酵后期菌丝生长缓慢，出现菌体自溶，pH值回升。 （3）通气 在发酵初期，菌丝量不多的情况下，通气量可少些；到了菌丝生长旺盛期，由于菌丝大量增殖，通气量就大一些；发酵后期菌丝逐渐衰老，代谢能力弱，通气量相对就减少。 （4）搅拌 加大供氧量； 增加菌体和气—液接触； 通过搅拌排除二氧化碳和代谢产物，并保持菌丝体处于均匀悬浮状态。 转速：一般在100-200r/min； （5）消泡 机械消泡 消泡剂消泡：植物油或矿物油，用量0.03％—0.035％，加油过量对菌丝体生长与代谢有一定的影响。一般在培养过程中出现泡沫上升可少量多次的添加，但尽量少加或不加。 （6）菌种龄与接种量 接种量：5％—10％。 接种量少了菌丝体生长速度慢，会延长发酵周期；接种量太多则使菌丝体生长过快，培养液粘度增加，造成氧气不足，菌丝老化快，既降低有效物质的积累，又给后处理带来困难。 四、灵芝深层发酵的生产工艺 工艺流程： 斜面菌种→摇瓶种子→种子罐→繁殖罐→发酵罐 （2）摇瓶种子培养 制作方法同第2节---灵芝子实体的培养 1）菌体形态：灵芝菌丝长分枝、菌丝壁上易见芽头与锁状联合，发酵液清香，菌丝球多，发酵液稍有黏稠； 2）菌丝量：10％—15％(湿重)； 3）酸碱度：发酵液pH3.0左右； 4）镜检：平皿检验无染菌； 5）发酵周期：48—56小时； （3）种子罐培养 培养基配方：玉米粉（或玉米淀粉）1%，蔗糖2%，酵母粉0.2%， KH2PO4 0.2%，豆油适量，pH自然。 培养条件 转罐时间 种子液由稀变调．菌丝体或菌丝球由少变多，镜检菌丝体粗壮，细胞内充满原生质，分布均匀、无空泡。同时，观察菌丝特性有锁状联合，发酵液变淡黄色，种子液有清香味，无杂菌污染即可转罐。 （4）发酵罐培养 培养基 培养基配方：玉米粉1%，蔗糖2%，酵母粉0.2%， KH2PO4 0.1%，(NH4)2SO4，豆油适量，pH自然。 培养条件 1）罐定容500~2×105L，装料60%，接种量5-10%，罐压0.3-0.5 ×105Pa 2）温度：最适 27-30℃， 0-30h：温度梢高有利于灵芝菌丝的生长；30-150h：温度稍底有利于延长灵芝有效物质的分泌期 3）通气：空气流量为1：1 V / V min 4）搅拌：搅拌速度180 r/min 5）消沫：加入0.03%-0.035%的植物油 6） pH值：5.0-6.0 发酵过程中灵芝的代谢变化 （1）延滞期；（2）快速生长期；（3）稳定期和衰亡期。 在这几个时期里，灵芝菌体对碳氮源的利用很少，但pH值在发酵过