仪器分析——陈锋解析.pptxVIP

现代生化仪器分析;电泳的基本原理;电泳的分类; 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE);不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳;琼脂糖凝胶电泳;分离不同大小DNA片段的合适琼脂糖凝胶浓度;在凝胶电泳中，一般加入溴化乙锭（EB）--ethidium bromide染色，此时，核酸分子在紫外光下发出荧光，肉眼能看到约50ng DNA所形成的条带。;电泳缓冲液;电泳装置;;研究背景：;AbstractIntroduction：;质粒的构建;蛋白表达和纯化;检验重组蛋白准确表达;重组TSWV N蛋白可以与E.coli 的胞内RNA结合;TSWV N 蛋白可以形成不同形式的低聚物;由于做电泳使用的蛋白是用Ni-NTA纯化得到的蛋白，所以这些蛋白中带有组氨酸标签。为了排除低聚物的形成是由于这些标签引起的这一可能。我们把带有标签的蛋白的N末端的组氨酸标签切去得到不带有标签的蛋白。对这些蛋白进行相同的电泳分析，得到如下图的结果。;为了更进一步的证实以上的结论，我们在纯化的蛋白中加入了交联剂（戊二醛）。然后在5%-20%SDS分离，并用考马斯亮蓝染色。从电泳图中很明显的可以发现，随着交联剂的不断增加，各个类型低聚物的条带的颜色不断加深。这就又证实了以上的结论：TSWV N蛋白可以形成一系列的高度有序的低聚物。;TSWV N 蛋白的低聚物与RNA的结合;接下来为了确定N 蛋白结合RNA是否是形成蛋白低聚物所必须