2013分子生物学复习整理-Coffee资料.docx

2013年分子整理笔记 edit by Coffee 真核生物与原核生物翻译的异同。 答：（1）起始的异同： a. 相同点：都需要tRNA识别氨基酸并装载；都需要核糖体大小亚基解离；都需要起始因子； b. 不同点：起始tRNA携带的氨基酸不同，原核是甲酰甲硫氨酸，而真核是甲硫氨酸；原核中甲酰甲硫氨酸识别的起始密码子有三种AUG/GUG/UUG，而甲硫氨酸只识别AUG；原核中需要SD序列帮助mRNA与小亚基结合，而真核没有SD序列，需要5‘端帽子引导两者结合；原核中不需要通过扫描寻找起始密码子，而真核中需要扫描寻找起始密码子；原核中起始因子比较简单，种类少，而真核中起始因子要复杂的多，种类也多；原核中起始的控制是通过mRNA二级结构影响起始和反馈控制，而真核中通过起始因子磷酸化来控制。 （2） 延伸过程：两者相似，都包括进位、转肽、移位，都需要延伸因子和GTP，只是延伸因子不同； （3）终止过程??相似：都需要释放因子等多种蛋白的参与。 简述并举例生物信息学的研究方法。 答：生物信息学是把基因组DNA序列信息分析作为源头，找到基因组序列中代表蛋白质和RNA基因的编码区；同时，阐明基因组中大量存在的非编码区的信息实质，破译隐藏在DNA序列中的遗传语言规律；在此基础上，归纳、整理与基因组遗传信息释放及其调控相关的转录谱和蛋白质谱的数据，从而认识代谢、发育、分化、进化的规律。 生物信息学还利用基因组中编码区的信息进行蛋白质空间结构的模拟和蛋白质功能的预测，并将此类信息与生物体和生命过程的生理生化信息相结合，阐明其分子机理，最终进行蛋白质、核酸的分子设计、药物设计和个体化的医疗保健设计。 首先，它需要一定的计算能力，包括相应的软、硬设备。要有各种数据库或者能与国际、国内的数据库系统进行有效的交流。要有发达、稳定的互联网络系统；同时，生物信息学需要强有力的创新算法和软件。没有算法创新，生物信息学就无法获得持续的发展。最后，它要与实验科学，特别是与自动化的大规模高通量的生物学研究方法与平台技术建立广泛、紧密的联系。这些技术，既是产生生物信息数据的主要方法，又是验证生物信息学研究结果的关键手段。 RNAi的原理和应用。 答：RNA干扰( RNA interference, RNAi)是指双链RNA诱导同源mRNA 降解导致基因表达抑制的现象,又称基因沉默,是一种转录后基因沉默(post- transcriptional gene silencing, PTGS)现象,是生物体在进化过程中抵御病毒感染及防御重复序列和突变引起基因组不稳定的保护机制。 RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。 其机制分两步： 长双链RNA被细胞源性的双链RNA特异的核酸酶切成21～23个碱基对的短双链RNA，称为小干扰性RNA（small interfering RNA）。 小干扰性RNA与细胞源性的某些酶和蛋白质形成复合体，称为RNA诱导的沉默复合体（RNA-induce silencing complex,RISC）该复合体可识别与小干扰性RNA有同源序列的mRNA，并在特异的位点将该mRNA切断。 它的应用： RNAi在探索基因功能中的应用：由于RNAi技术可以利用siRNA或siRNA表达载体快速、经济、简便的以序列特异方式剔除目的基因表达，所以现在已经成为探索基因功能的重要研究手段。同时siRNA表达文库构建方法的建立，使得利用RNAi技术进行高通量筛选成为可能，对阐明信号转导通路、发现新的药物作用靶点有重要意义。 RNAi在基因治疗领域中的应用：RNAi作为一种高效的序列特异性基因剔除技术在传染性疾病和恶性肿瘤基因治疗领域发展极为迅速。在利用RNAi技术对HIV-1、乙型肝炎、丙型肝炎等进行基因治疗研究中发现，选择病毒基因组中与人类基因组无同源性的序列作为抑制序列可在抑制病毒复制的同时避免对正常组织的毒副作用。同时将抑制序列选择在特定的位点，可对部分有明确基因突变的恶性肿瘤细胞如含有BCL/ABL或ML1/MTG8融合基因的白血病细胞产生凋亡诱导作用。此外尚可通过使用肿瘤特异性启动子如hTERT启动子、survivin启动子或组织特异性启动子如酪氨酸酶启动子、骨钙素启动子引导针对某些癌基因或抗凋亡分子的siRNA或shRNA表达，从而达到特异性杀伤肿瘤细胞的目的。 真核mRNA5帽子和3pol(A)的功能。 帽子分步合成：首先，RNA焦磷酸酶将mRNA末端的磷酸集团去掉，然后鸟苷转移酶水解GTP在此末端加上GMP，接着两个甲基转移酶分别将鸟苷第7位的N和倒数第二个碱基的2’-OH甲基化