3_血红蛋白的提取与分离综述.ppt

血液 血 浆 水分 固体物质 血浆蛋白 无机盐 磷脂 葡萄糖等 血细胞 白细胞 血小板 红细胞 （最多） 血红蛋白 （90％） 2个a－肽链 2个β一肽链 4个亚铁红素基团 ①血液组成 实验操作 （一）样品处理 血液由血浆和各种血细胞组成，其中红细胞最多。在红细胞的组成中，约90％是血红蛋白。血红蛋白由四个肽链组成(如图)，包括两个α-肽链和两个β-肽链。其中每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分了二氧化碳。血红蛋白因含有血红素而呈现红色。 血红蛋白 2个a－肽链 2个β一肽链 4个亚铁红素基团 实验操作 （一）样品处理 每个肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色 ②血红蛋白组成及作用 ③选材 本课题可选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液来分离血红蛋白。 实验操作 （一）样品处理 1、红细胞的洗涤 阅读课本内容，回答以下问题： 1、洗涤的目的？ 2、怎样洗涤？ 3、洗涤干净的标志是什么？ 1 除去其中的杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化。 2 采样分离－吸浆倒红－加液搅拌－重洗三次 3 直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。 实验操作 （一）样品处理 1、速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果。 问： 1、洗涤操作过程中，为什么要低速短时间离心？ 2、为了使红细胞洗涤干净，需如何处理？ 3、用质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤， 能否用蒸馏水或浓度高的氯化钠溶液？为什么？ 1、红细胞的洗涤 2、重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。 实验操作 （一）样品处理 红细胞的洗涤 洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化。采集的血样要及时分离红细胞，分离时采用低速短时间离心，如500 r／rain离心2min，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积的生理盐水(质量分数为0.9％的NaCl溶液)，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。 1.红细胞的洗涤 实验操作 （一）样品处理 2.血红蛋白的释放 血红蛋白的释放 将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加蒸馏水到原血液的体积，再加40％体积的甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌10 min。在蒸馏水和甲苯的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。 说出：蒸馏水和甲苯的作用。 实验操作 （一）样品处理 3.分离血红蛋白溶液 分离血红蛋白溶液 将搅拌好的混合液转移到离心管中，以2000 r／min的速度离心10min后，可以明显看到试管中的溶液分为4层。从上往下数，第1层为无色透明的甲苯层，第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层，第3层是红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。 问： 1、采用什么方法分离血红蛋白？ 2、离心分层后，各层的成分各是什么？ 3、用滤纸过滤，去掉什么成分？ 实验操作 （一）样品处理 取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液中（pH为7.0），透析12h。 4.透析 问：透析过程及透析目的？ 透析目的是：除去样品中分子量较小的杂质。 说明：透析袋是一种半透膜，能使小分子自由进出，而大分 子不能通过。 思考：根据材料进行实验设计：现有烧杯一只、透析袋一个、碘液、淀粉溶液、铁架台一个、棉线若干。探究碘液、淀粉是否能通过透析袋。写出实验步骤和结果预测。 实验操作 （一）样品处理 4.透析 实验操作 （一）样品处理 阅读课本相关内容，了