第14章核酸的物化性质重点.pptxVIP

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2017-05-17 发布于湖北
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第14章核酸的物化性质重点.pptx

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第14章核酸的物理化学性质;一、核酸的水解;（二）碱水解;（三）酶水解;核酸酶的分类; 核酸酶（nuclease）;二、核酸的酸碱性质;三、核酸的紫外吸收;鉴定纯度纯DNA的A260/A280应为1.8（1.65-1.85）纯RNA的A260/A280应为2.0。若溶液中含有杂蛋白或苯酚，则A260/A280比值明显降低。含量计算 1ABS值相当于：50ug/mL双螺旋DNA 或：40ug/mL单链DNA（或RNA）或：20ug/mL寡核苷酸判断DNA是否变性在DNA的变性过程中，摩尔吸光系数增大（增色效应）在DNA的复性过程中，摩尔吸光系数减小（减色效应）;四、核酸的变性、复性及杂交;;DNA的变性是爆发式的，变性作用发生在一个很窄的温度范围内。 DNA的双螺旋结构失去一半时对应的温度称为解链温度（melting temperature, Tm）。;影响DNA的Tm值的因素;;（二）复性 (renaturation) 变性的DNA在适当的条件下，两条彼此分开的DNA单链重新缔合成为双螺旋结构的过程。;;不同来源的DNA单链间或单链DNA与RNA之间只要有碱基配对的区域，在复性时可形成局部双螺旋区，称核酸分子杂交（hybridization）。制备特定的探针（probe）通过杂交技术可进行基因的检测和定位研究。;;提取DNA;Northern Blotting 研究对象是mRNA，探针一般是DNA。总RNA或mRNA需在变性条件下电泳（乙二醛、甲醛）。;基因芯片;小结