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Western blot技术总结 Xiangbin CHEN Western blot的原理 实验设计和准备 实验操作的一般流程 常见问题及分析 内容提纲 Western blot的原理 实验设计和准备 实验操作的一般流程 常见问题及分析 内容提纲 Western blot的原理 Western blot（蛋白免疫印迹）:将电泳分离后的细胞或组织的总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。 印迹法（blotting）:是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 Western blot的原理 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS） Western blot的原理 电泳印迹法（electroblotting ) Western blot的原理 抗体特异性识别特定的抗原 Western blot的原理 实验设计和准备 实验操作的一般流程 常见问题及分析 内容提纲 Western blot的实验设计 胶的厚度 分离胶的浓度 梳齿的数目 上样顺序 选择合适的蛋白marker 转膜时间 0.75mm、 1mm、 1.5mm 5%~15% （据目的蛋白的大小） 根据目的蛋白的大小 0.5~2h（据目的蛋白的大小） Western blot的原理 实验设计和准备