14毛细管电泳法解说.ppt

1、CE基本原理 2、电渗现象与电渗流 CE分离过程 CE的主要分离方式 Pharmaceutical Chromatographic Analysis 精業濟群 第十四章 毛细管电泳法 Chapter 14 Capillary Electrophoresis Pharmaceutical Analysis 精業濟群 Pharmaceutical Chromatographic Analysis 精業濟群 第十四章 毛细管电泳法 Chapter 14 Capillary Electrophoresis Pharmaceutical Analysis 精業濟群 精業濟群 精業濟群 精業濟群 精業濟群 精業濟群 * 显然，?P和 ? 是控制参数，其中?P 是进样动力，可以通过如下几种方式进行：（a）在进样端加气压（正压）；（b）在出口端抽真空（管尾抽吸，负压）；（c）利用虹吸作用，即所谓的重力进样。 电动进样的控制参数是电场强度E和进样时间?。通过改变进样电压和进样时间可以控制进样量。其中E是进样动力，取值多在1～10 kV/60cm之间，仅为分离时操作电压的1/5～1/3。? 是进样时间，取值通常在1～10 s之间，有时可达1 min或更大。电动进样对毛细管内的填充介质没有特别限制，可实现完全自动化，但在电迁移进样中存在一种歧视效应，即电泳淌度大的组分进样量大，电泳淌度小的组分进样量小或不进，会降低分析的准确度和可靠性。 * Section 14--1 概述（Generalization） The Progress of Chromatography CE 气相色谱 柱色谱 薄层色谱 纸色谱 经典液相色谱 高效液相色谱 HPLC 20世纪 30~40年代 50年代 现在 简介 70年代 80年代末 高效毛细管电泳 HPCE GC/LC-MS CE-MS 联用技术 ?特点：灵敏度高，选择性好，效能高，分析数度快，应用范围广 Owner of Nobel Prize ：1948年，瑞典Tiselins，电泳和吸附分析；1952年，英国马丁(Martin)和辛格(Synge)，分配色谱。 The History of CE 什么是电泳？ 经典电泳分析Classic Electrophoresis 高效毛细管电泳分析High Performance Capillary Electrophoresis CE的特点 高灵敏度 紫外检测器的检测限可达10-13～10-15 mol，激光诱导检测器可达10-19～10-21 mol 高分离效能 每米理论塔板数可达几百万甚至几千万 高速度 通常的分析时间不超过30 min。有1.7 min内分离19种阳离子及3 min内分离30种阴离子的报道； 样品用量少 只需纳升级的进样量； 分析成本低（消耗少） 只需少量（几毫升）流动相，分析过程是在价格低廉的毛细管柱中进行行 应用范围广 可分离小分子（氨基酸、药物等）、离子（无机及有机离子）、生物大分子（蛋白质等）、甚至各种颗粒（如细胞、硅胶颗粒等），具有“万能”分析功能或潜力。 “三高二少一广” CE分类 1. 毛细管区带电泳（CZE） 又称自由溶液毛细管电泳 2. 毛细管凝胶电泳（CGE） 属非自由溶液电泳，含有“分子筛”效应。 3. 毛细管等速电泳（CITP） 电泳型 4. 毛细管等电聚焦（CIEF） 按等电点分离，属电泳型，要求完全抑制电渗流动。 5. 胶束电动毛细管色谱（MECC） 又称电动色谱（EKC），是电泳技术和色谱技术巧妙结合的分离新技术，为CZE扩展的色谱型。 6. 毛细管电色谱（CEC） 又称毛细管电动色谱，属非自由溶液色谱型。 7. 微乳液电动毛细管色谱（MEEKC） 为CZE扩展的色谱型 8. 非水毛细管电泳（NACE） 属自由溶液电泳型。 Section 14-2 CE的基本装置 毛细管及温控系统 进样系统 电路系统 检测系统 Company Logo 1.高压电源与电路系统 0～30 kV 稳定、连续可调的直流电源； 电解槽，电解质溶液。 2. 毛细管柱与控温系统 毛细管材料：石英，内径20～75μm，长度=1m 温度系统。 Company Logo 进样量：毛细管长度的1%-2%；纳升级、非常小 方式：毛细管一端插入样品瓶，利用不同作用力进样 （虹吸、电压、浓度差） 3.进样方式 4. 检测器： UV、FL、MS 激光诱导荧光（Laser Induced Fluorescence Detector） Sectio