聚丙烯酰胺凝胶电泳分离过氧化物同工酶重点.pptVIP

实验六 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离过氧化物同工酶（垂直板状） 一、目的意义 同工酶 凡能催化同一种化学反应，但其分子结构和带电性质不同的一组酶称同工酶（isoenzyme） 电泳 各种生物大分子在一定pH条件下，可以解离成带电荷的颗粒，这种带电颗粒在电场的作用下向相反电极移动的现象称为电泳（electrophoresis）。 二、实验原理 聚丙烯酰胺凝胶 垂直板电泳 不连续系统 分离因素 AP-TMTED催化体系 TEMED催化AP生成硫酸自由基： S2O82－ 2SO4·ˉ 硫酸自由基的氧原子激活Acr单体并形成单体长链： 3、采用不连续垂直板状聚丙烯酰胺凝胶电泳(缓冲液、pH值和凝胶孔径不同) 不连续系统 浓缩效应 4、蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的分离因素 电荷因素 蛋白质分子形状和大小相同，所带电荷性质和数量不同 分子大小 蛋白质分子形状和所带电荷性质和数量相同，分子大小不同 分子形状 蛋白质分子所带电荷性质和数量相同，分子形状不同 电泳过程示意图A为电泳前3层凝胶排列顺。B显示电泳开始后，蛋白质样品夹在快、慢离子之间被浓缩成极窄的区带。C显示蛋白质样品分离成数个区带。 三、实验操作 1、电泳槽的安装 本实验使用夹芯式垂直板电泳槽：将两片干燥