认识无菌室及无菌操作预案.pptVIP

项目一 入门指导 认识无菌室及无菌操作 微生物实验室包括操作室、清洗消毒室和无菌室。无菌室必须是一间独立的房间。 室内光线应明亮，但避免阳光直射；四壁和地面应 平滑，便于清洁和消毒；室内通风良好；有安全、适宜的电源和充足的水源以及存放试剂及物品的橱柜。 一、无菌室 是微生物检测的重要场所与最基本的设施。 1、无菌室的结构 （1）无菌室通常包括缓冲间和操作间。 （2）工作间的内门与缓冲间的门力求迂回。 （3）无菌室每3m2的面积应配备紫外线灯。 （4）有条件的无菌室应设有0.5-0.7m2的传递窗。 （5）缓冲间内需配有清洁用的水源，安装自动开关，并有足够面积保证工作人员更换专用的工作服和鞋帽。 （6）工作间内设有固定工作台。有独立空调和空气净化设备。 缓冲间 2、无菌室的使用要求 （1）应密封良好，墙面和地面应当光滑，易于清洁，面向室外的窗户应为双层玻璃。 （2）工作台高度约为80cm，采用无渗漏、耐腐蚀的材料，便于清洁、消毒。工作台、地面和墙壁可用新洁尔灭或过氧乙酸溶液擦洗消毒，不得存放与实验无关的物品。 （3）无菌室每次使用前后应用紫外线灭菌灯消毒，照射时间不低于30min。关闭紫外灯后30min才能进入。紫外线灯管每隔两周需用酒精棉球擦拭。 （4）无菌室内应备有一些专用的仪器设备和器材。 （5）实验操作时，必须穿专门的工作服和鞋帽。 （6）需带入无菌室使用的仪器、平皿等物品，均应 包扎严格，并用适当方法灭菌。 （7）无菌室应具备适当的通风和温度调节的条件。无菌室的推荐温度为20-25℃，湿度为40%-60%，做好无菌室的使用记录和温湿度记录。 3、无菌室的无菌程度测定方法 将已配制并灭菌好的琼脂平皿（3-5个）放置在无菌 室工作位置的左、中、右等处，并开盖暴露15min， 然后倒置于36℃培养箱中培养48h，取出观察。 4、无菌室的消毒 （1）一般情况下可酌情定时用丙二醇溶液熏蒸消毒。 （2）霉菌较多时，先用5%石碳酸喷洒室内，再用甲醛熏蒸。 （3）细菌较多时，可采用甲醛和乳酸交替熏蒸。 二、超净工作台 超净工作台与生物安全柜两者之间是有本质区别的， 生物安全柜是一种负压的净化工作台，正确操作生物 安全柜，能够完全保护工作人员、受试样品并防止交 叉污染的发生；而超净工作台只是保护操作对象而不 保护工作人员和实验室环境的洁净工作台。 四、无菌操作 1、无菌 是指物体中没有活的微生物的存在。 2、无菌操作 是指防止微生物进入人体或物体的操作方法 3、无菌操作 （1）接种食品前，首先用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净。 （2）接种用的吸管、平皿、培养基等器具必须经消毒。对已打开包装未使用完的器皿，不能留待下次使用。 （3）接种样品、转种菌种必须在酒精灯前操作，接种时，吸管从包装中取出后及打开试管盖都要过火消毒。 （4）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖部不得触及试管或平皿边。接种时，打开培养皿时间应尽量短。平皿接种时，通常把平皿的面倾斜，把培养皿的盖打开一小部分进行接种。 （5）接种环和针在接种菌种前应经火焰灼烧全部金属丝。 五、灭菌和消毒 是微生物实验技术中最基本的操作，从事药品生产和 检验的人员都应当了解消毒与灭菌的方法及其意义， 严格遵守操作规程，否则会影响产品质量，危害患者 安全。 1、灭菌 杀灭物体中或物体上所有微生物（包括病原微生物和 非病原微生物）的繁殖体和芽孢的过程。灭菌方法分 为物理灭菌法和化学灭菌法。 2、消毒 用物理、化学或生物学的方法杀死病原微生物的过程。 具有消毒作用的药物称为消毒剂。 3、常用的消毒试剂 4、常用的灭菌方法 （1）加热灭菌 通过加热高温使菌体蛋白质并行凝固，酶失活，从而 达到杀菌目的。加热灭菌法包括湿热灭菌和干热灭菌。 同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，湿热的穿透 力比干热强，可增加灭菌效力；湿热的蒸汽有潜热存 在，这种潜热，能迅速跳被灭菌物品的温度。 ① 干热灭菌法 通过使用干热空气杀灭微生物的方法。通常是把待灭 菌的物品包装后，放入干燥箱中加热至160℃，维持 2h，适用于空玻璃仪器、金属器具的灭菌。 ② 湿热灭菌法 a)巴氏消毒法 巴氏消毒法既可杀死液体中致病菌的繁殖体，又不 破坏液体物质中原有的营养成分。典型的温度时间组 合有两种：一种是61.1~62.8℃，30min，另一种是 87.7℃，10min，现多用后一种。巴氏消毒法适用于 或酒类的消毒 b)煮沸消毒法 将物品加热煮沸20-30min从而达到灭菌的目的，但是 不能完全杀灭芽孢。适用于器材、器皿及小型日用物 品等的消毒 c）高压蒸汽灭菌法 利用水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理。