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生物化学与分子生物学实验 分光光度计 基本原理：溶液溶质在其一定波长的吸收光中，其吸光度值与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比，即遵循朗伯—比尔定律，通过也在一定液体厚度时测定其吸光度来与标准曲线比较从而测得待测液溶质浓度。 吸光度与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比，称为朗伯—比尔定律，简称比尔定律，即光的吸收定律。其数学表达式为： A＝-lgT＝εbc A：吸光度，又称光密度“O.D”； ε：吸光系数（L·mol－1·cm－1）；比例常数，称吸光系数 b：样品光程（cm），通常使用1.0cm 的吸收池，则b=1cm； c：样品浓度（mol/L）。 吸光度“A”具有加和性,即混合物的总吸光度等于溶液中的各组份各自在该波长下吸光度的算术和。这是多元混合物分光光度法定量分析的基础。 若溶液中各溶质的吸光系数ε相同，则各溶质吸光度的大小与溶质浓度成比例。 例：尿嘧啶核苷酸溶液用1cm石英吸收池测定 260nm的吸光度为0.650，用同一吸收池测定纯溶剂的吸光度为0.070，已知其摩尔吸光系数 = 8.2×103 M-1cm，计算其摩尔浓度. ∵A＝εbC ∵A＝（溶剂加样品的吸光度）－（溶剂的吸光度） ∴A＝0.650－0.070＝0.580 ∵b＝1cm