1细胞破碎2012.pptVIP

作用机理：利用匀浆器所产生的剪切力将组织细胞破碎。 HC23-高压细胞破碎机 * * 细胞破碎常用方法 破碎方式 机械法 非机械法 研磨法 组织捣碎法 酶溶法 化学法 物理法 细胞破碎常用方法 高压 匀浆 超声破碎 细胞破碎机理 组织捣碎匀浆机 （一）组织捣碎法 利用组织捣碎机的高速旋转叶片所产生的剪切力将细胞捣碎。 一 机械法 （二）匀浆法 DY89-1 型电动玻璃匀浆机 （三）超声波破碎 ?破碎原理：超声波作用下液体发生空化作用，产生极大的冲击波和剪切力，使细胞破碎。 超声波破碎仪 （一）酶溶法 1 原理：利用酶反应分解破坏细胞壁组分的特殊化学键，从而达到破碎细胞的目的。 2方法 （1）外加酶法：根据细胞壁的组分组成特点，选用合适的酶，分解破坏细胞壁，然后在低渗溶液中使细胞破裂。 例如：溶菌酶（lysozyme），它能专一地分解细胞壁上糖蛋白分子的β－1,4糖苷键。 （2）自溶法：特殊的酶溶方式 ，所需的溶胞酶由生物细胞自身产生 。 当细胞在一定的 pH 和适宜的温度条件下保温一段时间后 ， 即可通过细胞自身存在的酶系将细胞破坏 ，使细胞内物质释出 ，其效果取决于自溶条件 。 影响因素：温度 、时间 、 p H 、激活剂和细胞代谢途径 二 非机械法 （二）化学破碎法 1 概念 利用某 些化学试剂 改变细胞壁或细胞膜的通透性（渗透性）使胞内物质有选择地渗透出来 的处理方法叫化学破碎法。 2常用的化学试剂 （1）有机溶剂法 有机溶剂可破坏细胞壁或膜中的类脂结构 ，从而改变细胞壁或细胞膜的透过性 ，再经提取可使膜结合的酶或胞内酶等释放到胞外 。 常用的有机溶剂：甲苯 、丙酮 、丁醇 、氯仿等 。 （2）表面活性剂法 可促使细胞某些组分溶解 ，其增溶作用有助于细胞破碎 。 常用的表面活性剂： Trition X － １００ 、Tween等 （三）物理方法 1. 反复冻融法 利用细胞在快速冷冻时，细胞内水很快结晶，形成大量晶核，体积增大，将细胞胀破 2. 温度差破碎法 利用温度的突然变化使细胞通过热胀冷缩的作用而破碎的方法 例如：将待破碎细胞在90℃维持数分钟，立即放入冰水浴使之冷却，如此反复多次，绝大部分细胞可以被破碎。从细菌或病毒中提取蛋白质和核酸时可用此法。 3. 干燥法 主要通过在干燥过程中使细胞壁膜结合的水分丧失，细胞渗透性发生改变，当用丙酮、丁醇或缓冲液等对干燥细胞进行处理时，胞内物质就容易被抽提出来。可分为：空气干燥、真空干燥、冷冻干燥和喷雾干燥。 4.渗透压冲击法 细胞在高渗透压介质中平衡后，再突然将其转至低渗透压环境中，水会大量进入细胞，使细胞壁和膜胀破 ??????? 5. 撞击破碎法 细胞冷冻后成为刚性球体，降低破碎难度。 操作：细胞喷雾高速冻结高速载气（300 m/s氮气流）将冻结的微粒子送入破碎室，高速撞击撞击板。