第三章核酸化学资料.pptVIP

3.DNA变性的特征 变性核酸将失去其部分或全部的生物活性。 变性改变了DNA的二级结构。核酸的变性并不涉及磷酸二酯键的断裂，所以它的一级结构(碱基顺序)保持不变。 DNA的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。 DNA解链温度 紫外吸收值明显增加，即增色效应。 粘度降低，沉降系数增加。 解链曲线：在连续加热DNA的过程中以温度对A260值作图，所得的曲线称为解链曲线。 Tm：紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm)。其大小与G+C含量成正比。 影响Tm值的因素 ① DNA的均一性：均一DNA（如病毒）的Tm值范围较小； ② DNA中G-C对的含量 ：分子中G和C的含量越高，越不易变性，Tm值越高。可通过经验公式计算： （G+C)%=(Tm-69.3) ×2.44 ③ 盐离子强度 ： Tm值随溶液盐浓度增加而增大； 一般DNA的Tm值在70-85?C之间， Tm值较低，易变性，不易保存 增色效应与减色效应 天然DNA分子在热变性条件下，双螺旋结构破坏，碱基暴露，在紫外光260nm波长处的吸收度明显增加，此现象称为增色效应。 变性DNA分子复性形成双螺旋结构时其紫外吸收降低的现象称为减色效应。 （二）DNA的复性 1.变性DNA在适当的条件下，两条彼此分