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2.液相色谱的固定相和流动相 功能 组别分离（脱盐）：分离大小两类不同的分子即无机盐与生物大分子； 分级分离：将分子大小相近的物质分开，通常为大分子间的分离。 大分子物质中除去小分子物质时，选用交联度大的型号；小分子物质与大分子物质分离，选择交联度小的型号。 2.液相色谱的固定相和流动相 (4) 流动相 　 一般水溶性试样选择水溶液为流动相，而非水溶性试样则选择四氢呋喃、氯仿、甲苯等有机溶剂为流动相。 3.经典液相柱色谱法 硅胶吸附柱色谱是较为常用的经典液-固吸附色谱，可用于分离极性至弱极性的化合物。 3.1 硅胶吸附柱色谱 使用时，一般需经过色谱柱制备、加样、洗脱和检出四个基本步骤。 3.经典液相柱色谱法 3.经典液相柱色谱法 3.2 聚酰胺柱色谱 预处理 含有残留原料及溶剂，需水洗，丙酮、乙醇回流。干燥后研磨成细粉。 装柱 一般采用湿法装柱。 上样 洗涤和洗脱 3.经典液相柱色谱法 3.3 离子交换柱色谱 树脂溶胀 用水浸泡直至上层液透明。 装柱 一般采用湿法装柱。 树脂处理与再生离子交换树脂通常使用酸、碱进行处理，可采用1~2?mol/L的盐酸及氢氧化钠溶液，以4~6倍树脂床体积交替进行处理，可获得最佳效果。在酸及碱处理之间须用去离子水洗至中性。 上样 洗涤和洗脱 3.经典液相柱色谱法 3.4 凝胶柱色谱 凝胶溶胀 用溶剂浸泡入10倍的溶剂中。 装柱 湿法装柱。 平衡 加洗脱剂平衡。 上样 洗脱 4. 平面色谱法 定性参数——比移值Rf ，相对比移值(Rr) 相平衡参数——K、k’ 分离参数——分离度R 4.1 技术参数 4. 平面色谱法 1）比移值(Rf)、相对比移值(Rr) 比移值(Rf值) 溶质移动距离与展开剂移动距离之比 Rf =L/L0 L为原点至斑点中心的距离 L0为原点至溶剂前沿的距离 与组分及色谱条件有关 L0 原点 溶剂前沿 A B L1 L2 Rf的测量示意图 Rf=0 组分留在原点 Rf=1 组分随溶剂前沿一起移动 Rf可用范围是0.2～0.8，最佳范围是0.3～0.5。 4. 平面色谱法 相对比移值（Rr值） Rr可以大于1，也可以小于1。 4. 平面色谱法 例：已知被测物质A和参考物B在同一薄层板上进行色谱分析，展开后，溶剂前沿到原点的距离为18cm，A、B两物质斑点中心到原点的距离分别为12cm和9cm，请计算： （1）A物质的比移值。 （2）A、B两物质的相对比移值。 4. 平面色谱法 2）相平衡参数 （ ） 分配系数K= Cs/Cm 容量因子 k’= CsVs/CmVm K、k’与Rf值的关系： 　　　　　 在色谱条件确定的情况下，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为，K或k’大Rf小，K或k’小Rf 大。 4. 平面色谱法 3）分离参数 L2、L1——原点至两斑点中心的距离 d——两斑点中心间的距离 W1、W2——两色谱峰宽 分离度（R） 两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度（纵向直径）的比值。 4. 平面色谱法 例：在薄层板上分离A、B两组分的混合物，当原点至溶剂前沿距离为16.0 cm 时，两斑点质量重心至原点的距离分别为6.9 cm 和5.6 cm，斑点直径分别为0.83 cm 和0.57 cm。求两组分的分离度及Rf 值。 解： 4. 平面色谱法 4.2 薄层色谱法 （TLC ） 将固定相均匀涂铺在具有光洁表面的玻璃、塑料或金属板上形成薄层板，将一定量混合样品溶液置于薄层板一端确定位置(点样)，在密闭容器中用适当的溶剂(展开剂)展开后，根据组分在板上的位置和浓度进行分析的方法 4. 平面色谱法 (1) 常用吸附剂 硅胶：薄层用的硅胶粒度更细，一般在200~300 。 目最常用的硅胶G、硅胶GF254 、硅胶H、硅胶HF254 。 氧化铝：氧化铝H、氧化铝G和氧化铝HF254 。 按制造方法不同，可分为碱性氧化铝、酸性氧化铝和中性氧化铝。 4. 平面色谱法 (2) 展开剂及其选择 选择展开剂，要依据溶剂极性和他们的混溶性，溶剂对被分析物的溶解性，以及被分析物的结构。 4. 平面色谱法 展开剂的选择条件： ①对的所需成分有良好的溶解性； ②可使成分间分开； ③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间； ④不与待测组分或吸附剂发生化学反应； ⑤沸点适中，黏度较小； ⑥展开后组分斑点圆且集中； ⑦混合溶剂最好用新鲜配制。 4. 平面色谱法 (3) 薄层色谱实验技术