化学发光标记免疫法剖析.pptVIP

化学发光标记免疫分析法 何为化学发光标记免疫分析？ 1 第一部分 化学发光：又称为冷光，它是在没有任何光、热或电场等激发的情况下由化学反应而产生的光辐射。 化学发光 标记物为吖啶酯或者ABEI 直接化学发光 标记物为碱性磷酸酶或者辣根过氧化物酶 酶促化学发光 标记物为三联吡啶钌 电化学发光 化学发光剂 在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物 01 Add your texts here 01 02 03 04 吖啶酯 三联吡啶钌 鲁米诺及其衍生物 AMPPD 化学发光剂 吖啶酯:在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm的光，具有很高的发光效率，其激发态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。 化学发光剂 三联吡啶钌: [RU(bpy)3]2+是电化学发光剂，它和电子供体三丙胺（TPA）在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。 电化学发光剂反应原理 化学发光剂 鲁米诺:化学名称为3-氨基邻苯二甲酰肼 鲁米诺发光原理 化学发光剂 AMPPD:化学名称为?3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐? AMPPD发光原理 化学发光剂 酶标记 元素标记 标记技术 发光物标记 标记技术：将化学发光剂的分子与某些分子结合，直接或间接地测定待测组分。通过分析被标记物来完成对待测组分的测定 化学发光免疫分析 化学发光免疫分析（CLIA）：将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。 直接化学发光免疫分析 化学发光酶免疫分析 电化学发光免疫分析 发光 Y Y Y 磁微粒 被测抗原 + 抗体 + 带吖啶酯标记物抗体 Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y 冲洗后 --- 夹心法 （1） 加入H2O2 （pH10） （2） 加入碱 （pH10） 直接化学发光免疫分析 化学发光酶免疫分析 辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析 化学发光酶免疫分析 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析 电化学发光免疫分析 文献调研 2 第二部分 人体免疫球蛋白G检测 检测原理，A：初步免疫；B：竞争免疫 1.鲁米诺；2.FITC 425nm处鲁米诺的化学发光信号增强 525nm处的FITC发光信号降低 不同IgG浓度下CRET免疫传感器的荧光光谱。IgG浓度分别为：0 (a), 0.5 (b), 1 (c),1.5 (d), 2 (e), 2.5 (f), 3 (g), 3.5 (h), 及4 nM (i)。插入的曲线为荧光强度比率（R=I425/I525）随浓度变化曲线 表 人血清样品IgG浓度检测 相对标准偏差（RSD）：5% 检测限（LOD）：2.9 × 10?11 M 其他免疫法检测IgG的检测限： 时间荧光免疫分析：5 μg/L 流免疫分析5.0 ×10?7 M 电化学免疫分析法：1.0 × 10?10 M 荧光共振能量转移(LRET)免疫分析：0.88 μg/mL 人体免疫球蛋白A检测 化学发光夹心法检测lgA装置：多毛细管玻璃板的微孔示意图 化学发光免疫分析检测IgA过程 化学发光强度和lgA浓度的关系 集束板与96孔板检测lgA的比较 人体免疫球蛋白A检测