分子生物学补充.doc

基因工程在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之参入到原先没有这类分子的寄主细胞内，而能持续稳定地繁殖。 第一部分 基因表达 基因工程的主要内容或步骤 外源基因在原核细胞中的表达 外源基因在核细胞中的表达 常用载体： 1. Prokaryotic expression vector 原核表达载体 2. Baculovirus expression vector 昆虫杆状病毒表达载体 3. Mammalian expression vector 哺乳动物表达载体 4. Yeast expression vector 酵母表达载体 5. Adenoviral and retroviral vector 腺病毒及逆转录病毒表达载体 外源基因具备的条件：1.编码区不含插入序列；（mRNA-cDNA）2.位于启动子下游，方向一致，原有的读码框不变；3.含起始密码子、终止密码子；4.转录出的mRNA必须有SD序列，调整SD序列与第一个AUG间的距离（因为会对转译效率有影响）；5.产物比较稳定（如：融合蛋白、信号肽）；6.选择系统偏好的简并密码。 影响外源基因表达的因素启动子的强弱（主要因素） 基因的剂量RNA转译效率（SD互补、AUG-SD距离及序列、AUG前后核苷酸序列的适宜性）密码子表达产物的大小产物的稳定性 重组体导入细胞的方法 磷酸钙沉淀