感受态细胞的制备及检测.pptVIP

* 感受态细胞的制备及检测 2010级硕士生：张瑶 2013-6-1 微生物学实验课 感受态细胞（Competent cell） 细胞处于能够吸收外源DNA的状态称感受态，经特殊处理后处于此状态的细胞称感受体细胞。 电击法、CaCl2?、KCl等化学试剂法处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，能允许外源DNA分子进入 ； 进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。 感受态细胞（Competent cell） 常用大肠杆菌感受态细胞的区别 BL21感受态主要用用于蛋白表达的优化实验。 ? DH5α大肠杆菌感受态是一种常用于质粒克隆的菌株 JM109感受态在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13?phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补，从而显示β-半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株。 电击法与CaCl2 制备法的区别 电击法:利用瞬时高压电流（数千伏特）处理细胞悬浮液，使微生物细胞膜在高压电作用下发生去极化，产生微孔，悬液中溶解的核酸即可通过细胞膜上的空洞进入细胞内部。 CaCl2 法:利用低渗溶液处理细胞悬浮液微生物细胞膜结构发生变化，使得细胞在热激时（42℃，90s）变得很容易从溶液中摄取DNA。 感受态细