石蜡切片(三)、染色(四)重点剖析.pptVIP

实验三 石蜡切片法(三)——切片、贴片 一、实验原理 切片就是把包埋好的材料块用切片机切成所需要的厚度的切片带。 贴片是用粘贴剂把切片平铺贴在载玻片上，以便于染色。 二、实验用品 (一) 器材 切片机，切片刀，磨刀机或磨刀石，单面刀片，展片台，酒精灯，温度计，蜡铲，台木，毛笔，蜡带盘，载玻片，镊子。 (二) 试剂 粘片剂，氯仿。 (三) 材料 已包埋好的蜡块。 三、实验程序 (一) 切片 (二) 贴片 附：常用的粘片剂 1．蛋白甘油亦称为梅氏蛋白(Mayers albumen) 蛋白 50mL 甘油 50mL 水杨酸钠(防腐剂) lg 2．郝普特氏明胶粘片剂(Haupts gelatine fixative) 明胶 l g 蒸馏水 100ml 石炭酸 2g 甘油 15mL 实验四 石蜡切片法(四)——染色、封藏 一、实验原理 1．染色的一般原理 细胞和组织的不同结构之所以能被染成各种不同颜色，是由于染料对它们所起的物理或化学的综合作用。 (1) 物理作用：渗透、 吸收、吸附 (2) 化学作用 2．封藏的原理 封藏是使已经透明的材料，保存在适合折光率的封藏剂中(如封藏剂加拿大树胶的折光率为1.52，它与玻璃的折光率1.51很接近)，使材料能在显微镜下清晰的显示出来，并能长期保存。 二、实验用品 (一)器材 染色缸，酒精灯，树胶，树胶瓶，镊子，盖玻, 显微镜。 片, (二)试剂 酒精(30％、50％、70％、80％、95％、100％)。 染色液(0。5％苏木精)，4％铁明矾，2％铁明矾。 (三)材料 已切好的石蜡切片。 下面以海登汉铁矾苏木精染色法为例介绍如下。 (1) 将用二甲苯脱蜡的切片放入二甲苯和纯酒精的混合液中浸10min。 (2) 用纯酒精处理5～10min。 (3) 放入95％、90％、80％、70％、50％、30％的酒精中各2—5min。 (4) 水洗1min。 (5) 用2％或4％铁明矾水溶液媒染0.5—2 h。 (6) 水洗5min。 (7) 蒸馏水中更换数次约3～5min。 (8) 0.5％苏木精中染色1-24 h。 (9) 在清水中冲洗5min。 (10) 2％铁明矾水溶液分色(在显微镜下观察是否适度)。 (11) 流水冲洗10～30min。 (12) 入30％、50％、70％、80％、90％、95％、100％的酒精中顺次脱水，每级3—5min。 (13) 放入纯酒精和二甲苯的混合液(1:1)中5min。 (14) 入二甲苯5min。 (15) 用加拿大树胶封藏。 附：常用的染料的性能及其配制方法 生物学上用的染料，按其来源可分为两大类，一类是天然染料，一类是人工染料。 天然染料是从动植物体中提取出来的，日常用的有苏木精、洋红、地衣红、靛青等。 最早的人工染料是由苯胺制成的，所以常称为苯胺染料。但以后多数的人工染料是由煤焦油中提取出来的。下面介绍常用的染料的性能及其配制方法。 一、天然染料 1．苏木精 苏木精是由洋苏木中提取出来的物质，氧化后形成苏木红，加入媒染剂(各种明矾)具有良好的染色作用，为最常用的染料之一。配成的苏木精溶液必须放置一定时间促其氧化(成熟)，成熟过程所需要的时间较长(至少4周)，如果急用，可往溶液中加入过氧化氢或碘酸钠等氧化剂，使之加速氧化，然后才能使用。 常用的苏木精配方有： (1)海登汉(Heidenhain)氏铁苏木精 甲液(媒染剂) 铁明矾(即硫酸铁铵) 2－4 g 蒸馏水 100ml (甲液必须在用时配制，保持新鲜) 乙液(染液) 苏木精 0.5g 纯酒精或95％酒精 10mL 蒸馏水 90mL 苏木精溶于酒精中，然后加蒸馏水混合，置于广口瓶内，用纱布缚住瓶口，静置使其氧化，4周成熟后使用。 (2)埃利希(Ehrlich)氏苏木精： 苏木精 1g 纯酒精(或95％酒精) 50ml 冰醋酸 5ml 甘油 50ml 钾矾(硫酸铝钾) 约5g(饱和量) 蒸馏水