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第十九章 DNA复制与修复 核酸、蛋白质等生物大分子的合成规律，特别是其调控机理的研究大大推动了疾病形成机制的解明及治疗药物的开发。 DNA复制 DNA是遗传物质 基因是DNA分子中各种核苷酸排列组成的一定片段 (一个功能区域）。 DNA具有贮存、传递（包括复制、转录）、接受（如反转录）遗传信息的功能，并与RNA，Pr间存在下列关系：—分子生物学的中心法则（central dogma） 第一节、DNA复制概述 原核生物 一个染色体 真核生物 多个染色体 染色体外遗传因子 细菌的质粒 真核生物的细胞器 寄生生物的DNA DNA的复制方式—半保留复制 Watson, Crick 提出的复制DNA的机制 — 半保留复制 半保留复制 — DNA两条链都作为模板合成两条新链 半保留复制:DNA复制时两条互补链分开,以每条链为模板,按碱基配对规律形成互补的新链以组成2个新DNA分子,每个子代DNA中的一条链来自亲代,另一条则是新合成的,这种复制方式称为半保留复制. 二、DNA复制的起点与复制方式 复制子：基因组能独立进行复制的单位称为复制子 每个复制子含有复制起点—控制复制起始 复制终点 二、DNA复制的起点与复制方式1、DNA的复制是定点起始双向进行的 真核生物染色体DNA是线性双链分子，有多复制起点，是多复制子 大肠杆菌染色体DNA的复制起点 ori C 细菌DNA的复制叉移动速度大约50000bp/min 真核生物染色体DNA的复制叉移动速度较慢，大约为 1000～3000bp/min 滚环复制 — 低等生物的非染色质DNA如plasmid DNA复制 环状DNA双链复制时,一股链先打开缺口, 5‘端向外伸展,在伸展出的单链上进行不连续复制,没有开环的另一股则一边滚动一边进行连续复制,开环与不开环的两股链均可直接作模板,合成两个环状的子双链. D-环复制 线粒体及叶绿体复制 一、有关DNA复制的酶 重要酶：DNA聚合酶、解除DNA高级结构的酶等 1.DNA聚合酶：（DNA polymerase）以脱氧核苷三磷酸（dNTP）为底物，催化合成DNA的一类酶。（不同生物有不同的种类） 1、原核细胞DNA聚合酶 pol.Ⅰ（1956），需Mg2+or Mn 2+ 功能 1.催化聚合：以单链DNA为摸板，四种dNTP为底物，与摸板DNA互补的一段具有3‘OH末端的低聚脱氧核苷酸为引物，聚合反应方向5’→3‘，产物是与摸板互补的DNA链。合成速度约1000-1200 dNTP/min 2.校正功能：外切核酸酶,3’→5‘外切酶—错配核苷酸, 5’→3‘外切酶—引物 pol.Ⅱ(1969) 功能 1.聚合;引物RNA，合成速度约2400 dNTP/min 2.外切酶;3’→5‘的外切酶活性, pol.Ⅲ 1969 功能 1、聚合、引物RNA，速度约50000 dNTP/min 2、外切酶；3’→5‘的外切酶活性 无5’→3‘的外切酶活性 pol.Ⅲ是真正的DNA复制酶，在摸板DNA 上从引物开始合成新链聚合由它催化。 pol.Ⅰ的功能主要为修复功能，切除错配核苷酸及引物并填补引物去除后的空缺。 pol.Ⅱ的功能可能是辅助pol.Ⅰ。 B、真核细胞的DNA聚合酶 DNA pol.α、β、γ、δ、ε (多亚基） 细胞核DNA复制, DNA pol.α DNA pol.δ ↓ ↓校正功能 引物合成 核DNA合成 （有3’→5‘外切酶活力） DNA修复,DNA pol.β,DNA pol.ε 主要参与DNA修复 线粒体DNA复制：DNA pol.γ 2、DNA连接酶 T A C A G G A A T G T C C T p p p p p p 3、松旋酶—核酸的拓扑结构 核酸的拓扑结构是指核酸分子的空间结构关系，是一种双螺旋核酸分子表现的曲线或曲面的空间关系。 生物体内的DNA分子通常处于负超螺旋状态 3、松旋酶—解除高级结构的酶 DNA松旋酶（gyrase）——DNA拓扑异构酶 拓扑异构酶Ⅰ：通过“切口-封口” （单链断裂）反应，就可使维持DNA超螺旋的作用力释放出来，从；而解除超螺旋，放松负超螺旋。旋转程度降低会出现负超螺旋 拓扑异构酶Ⅱ：放松正超