肾素和其受体对大鼠血管平滑肌细胞增殖与颈动脉损伤后内膜增生的影响和机制.pdf

RNA RNA 实验一 合成并鉴定有效RRNNAA干扰质粒，本部分实验通过设计及构建4 对(P)RR的 pcDNATM6·2-GW/EmGFPmiRmiRNA及1对阴性对照miRNA干扰质粒，通过DNA测序 进行鉴定。将干扰质粒用LipofectamineTM2000转染VSMCs，倒置荧光显微镜下观察绿 色荧光及流式细胞术检测转染效率，real time-PCR及Westernblot检测4对干扰质粒、阴 性对照质粒对VSMCs(P)RR的mRNA及蛋白表达的影响。 实验二 观察肾素及其特异性受体对大鼠血管平滑肌细胞增殖、细胞周期素 D1(Cyclin D1) ProliferatingCell NuclearAntigen, PCNA D1(Cyclin D1) ProliferatingCell NuclearAntigen, PCNA DD11((CCyycclliinnDD11))及增殖细胞核抗原（PPrroolliiffeerraattiinnggCCeellllNNuucclleeaarrAAnnttiiggeenn,,PPCCNNAA）表达的影 响，本部分实验将分为两部分： VSMCs CyclinD1 PCNA VSMCs CyclinD1 PCNA 第一部分：探讨不同浓度肾素对VVSSMMCCss增殖、CCyycclliinnDD11及PPCCNNAA表达的影响，实 验分为以下五组：①空白组(None)：未加任何处理；②对照组(Control)：给予Losartan (AT1 -6 -5 -10 受体阻断剂)10 mol/L 和 PD123319 (AT2受体阻断剂) 10 mol/L；③Renin10 组： -10 -9 -9 -8 给予10 mol/L Renin 处理；④Renin10 组：给予10 mol/L Renin 处理；⑤Renin 10 ： -8 -6 给予 10 mol/L Renin 处理。除空白组外，其余各组均给予 Losartan 10 mol/L 和 -5 PD123319 10 mol/L 分别预处理 30min，以阻断肾素的AngⅡ依赖性作用。 (P)RR VSMCs CyclinD1 PCNA (P)RR VSMCs CyclinD1 PCNA 第二部分：探讨((PP))RRRR对VVSSMMCCss增殖、CCyycclliinnDD11及PPCCNNAA表达的影响，实验分为 以下六组：①空质粒转染组(Negative)：转染空质粒；②对照组(Control)：转染空质粒后给 -9 予Losartan 和PD123319处理；③Renin 组：给予10 mol/LRenin 处理；④(P)RR干扰+ -9 Renin组：转染(P)RR干扰质粒后给予10 mol/LRenin处理；⑤血小板源性生长因子-BB （Platelet-DerivedGrowthFactor BB，PDGF-BB）组：给予10nmol/LPDGF-BB处理；⑥(P)RR 干扰+ PDGF-BB 组：转染(P)RR 干扰质粒后给予10nmol/LPDGF-BB 处理。除空质粒转