黄曲霉素素G1与IL6协同作用对肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的影响和其机制的研究.pdf

中文摘要 黄曲霉毒素Gl和IL．6协同作用对肺泡II型上皮细胞损伤的影 响及其机制的研究 摘 要 目的：慢性炎症反应释放氧化介质和各种细胞因子，在恶性肿瘤发生 中起重要作用。本实验室前期研究发现长期灌胃黄曲霉毒素G1(AFGl) 诱导的慢性炎症反应在肺腺癌发生中起重要作用。慢性炎症反应可以造成 肿瘤来源的靶细胞II型肺泡上皮细胞(AT-II)氧化应激损伤和增殖，在 这个过程中我们发现炎症细胞因子TNF．0c和IL一6在炎症肺组织中高表达。 IL．6是目前发现的具有癌基因功能的炎症细胞因子，但在AFGl诱导的炎 症微环境中，IL．6是否加剧AFGl致APII细胞损伤作用还不清楚。 为了揭示在AFG，诱导的炎症微环境中IL．6对A-T-II细胞氧化应激损 伤的影响，本研究体外培养具有人APII细胞特征的A549细胞，给予IL一6 和AFGl共同作用，模拟IL一6和AFGl协同作用的慢性炎症微环境。探讨 以及A549细胞损伤的影响。 方法： 1细胞培养与处理 U／rnl 具有人AT-II细胞特征的A549细胞培养于含10％J抬牛血清、100 青霉素、100 细胞贴壁生长。 选择对数生长期的细胞(传代后24h)随机分为溶剂对照组和实验组。 联合处理，溶剂对照组给予终浓度为O．08％的DMSO(每组设平行样本3 个)，继续培养24h收集细胞进行相关指标检测。 2流式细胞术(FCM) 合处理对A549细胞中活性氧生成的影响。 3免疫组织化学(IHC)染色 万方数据 中文摘要 按照我研究组前期灌胃AFGl诱导NIH小鼠肺腺癌的动物造模方法， 经口给予Balb／c小鼠灌胃AFGl6个月(每周3次)，停止灌胃AFGl。选 择AFG，灌胃6个月的小鼠慢性炎症肺组织标本，检测肺泡上皮细胞中与 的表达情况。 blot) 4蛋白免疫印记(Westem 采用蛋白免疫印记(Westernblot)方法分别检测AFGl单独处理和 AFG．与IL．6联合处理对A549细胞的影响，检测氧化应激损伤相关蛋白 Bax等的表达情况。 5Real。timePCR 采用Real．time 合处理对炎症细胞因子分泌及A549细胞中Cyp450酶活性的影响，包括 IL—l 6MTT 细胞存活率的影响。 7阻断剂处理 h后收集细胞检 阻断剂组、和阻断剂+AFG，+IL．6处理组。细胞处理24 测相关指标。 8siRNA转染 用100 pmol 培养24 controlsiRNA h收集细胞进行相关指标检测。同时转染Negative (NC 9统计学分析 应用SPSS 万方数据 中文摘要 P0．05时认为差异有统计学意义。 结果： 1 FCM和Westem Blot实验结果表明，与AFG】单独处理组相比，IL．6 激损伤。 2IL一6和AFGl联合处理对A549细胞中细胞因子表达的影响 Real。time PCR检测结果表明，与对照组相比，AFGl单独作用可以增 促进AT-II细胞分泌炎症细胞因子。 3灌胃AFGl‘肺部组织中Cyp450酶的表达情况 选择AFGl灌胃6个月的小鼠慢性炎症肺组织标本，检测肺泡上皮细 的表达水平较对照组明显升高(尸O．05)。 4IL．6和AFGl联合处理对A549细胞中Cyp450酶的