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吸光光度法 第一节 吸光光度法的基本原理 1-1 物质对光的选择性吸收 电磁辐射的二象性 研究物质在 紫外、可见光区 的分子吸收光谱 的分析方法称为紫外-可见分光光度法。紫外—可见分光光度法是利用某些物质的分子吸收200 ~ 800 nm光谱区的辐射来进行分析测定的方法。这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子 在电子能级间的跃迁，广泛用于无机和有机物质的定性和定量测定。 1-2 光吸收的基本定律——朗伯比尔定律 朗伯—比耳定律数学表达式 吸光度的加和性 3.摩尔吸光系数ε的讨论 方便、灵敏，准确度差、常用于限界分析. 2.单色器 3. 样品室 2.2 吸收光谱 不同物质吸收光谱的形状以及?max不同 －定性分析的基础 同一物质，浓度不同时，吸收光谱的形状相同，Amax不同 －定量分析的基础 3-1显色反应的选择 3.氧化还原显色反应 4.显色剂 3-2影响显色反应的因素及条件的选择 4-2 偏离朗伯—比耳定律的原因 （1）物理性因素 (2) 化学性因素 （3）共存离子干扰的消除 最佳读数范围与最佳值 控制适宜的吸光度范围 第五节 吸光光度法的应用 根据物料平衡 cM=[M]+[ML] cL=[L]+[ML] 若M和L在测定波长处无吸收 A=εML[ML] 当配位反应平衡时为A0， cM=[ML]则 εML=A0/cM 6. 双波长吸光光度法的应用 上页 5、络合物的组成 (1)络合物的组成的测定 摩尔比法: [前提]：1. M、R均无色，即M和R均不干扰MRn； 2. MRn稳定；3. n值大 M + nR ＝ MRn(有色） 固定CM，改变CR，配制一系列CR/CM不同的溶液，在λmax处分别测量各溶液的吸光度A，作A∽CR/CM图。 CR= CM= 最终体积10mL 1:1 3:1 c(R)/c(M) A 1.0 2.0 3,0 n=(CR/CM)转折点 摩尔比法适用于解离度小、稳定性高、络合比高的络合物组成的测定。 配合物稳定常数的测定 4 检测器：利用光电效应，将光能转换成 电流讯号。 光电池，光电管，光电倍增管 5 结果显示记录系统 检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理 吸光光度法仪器主要差异比较 石英 （185～4000） 玻璃 （350～3200） 吸收池 材料 氢灯 氘灯 180～375 钨灯 碘钨灯 320～2500 光源 紫外光 (200～400nm) 可见光 (400～750nm) 1 吸收曲线的讨论： （2）不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似λmax不变。而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和λmax则不同。 （1）同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长λmax (4)不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度 A 有差异，在λmax处吸光度A 的差异最大。此特性可作为物质定量分析的依据。 (5)在λmax处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵敏。吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。 吸收曲线的讨论： (3)吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为物质定性分析的依据之一。 用参比溶液调T=100%（A=0），再测样品溶液的吸光度，即消除了吸收池对光的吸收、反射，溶剂、试剂对光的吸收等。 2.参比溶液的选择 参比液的选择方法 溶剂作参比 试液空白(不加显色剂)作参比 试剂空白 (不加试样溶液)作参比 加掩蔽剂(M)后的试液作参比 试液无吸收,显色剂无吸收 试液有吸收,显色剂无吸收 试液无吸收,显色剂有吸收 试液有吸收,显色剂有吸收 1.选择显色反应时，应考虑的因素 灵敏度高、选择性高、生成物稳定、显色剂在测定波长处无明显吸收，两种有色物最大吸收波长之差：“对比度”，要求△? 60nm。 2.配位显色反应 当金属离子与有机显色剂形成配合物时，通常会发生电荷转移跃迁，产生很强的紫外—可见吸收光谱。 [Fe3+-SCN-]2+ [Fe2+-SCN]2+ 第三节 显色反应及其条件的选择 某些元素的氧化态，如Mn（Ⅶ）、Cr（Ⅵ）在紫外或可见光区能强烈吸收，可利用氧化还原反应对待测离子进行显色后测定。 例如：钢中微量锰的测定，Mn2＋不能直接进行光度测定 2 Mn